乙型肝炎病毒核心抗體IgG抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的研究.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是最常見(jiàn)的引起人類(lèi)持續(xù)感染的病毒之一，世界范圍內(nèi)約有20億人曾感染過(guò)或正在感染乙型肝炎病毒，其中3.5億慢性乙型肝炎病毒感染者，截止到2010年的全球疾病負(fù)擔(dān)研究結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒感染以每年導(dǎo)致約78.6萬(wàn)人的死亡而名列人類(lèi)十大死亡原因之一。由于一些國(guó)家和地區(qū)仍然沒(méi)有推廣乙肝疫苗的計(jì)劃免疫和疫苗無(wú)應(yīng)答的不斷出現(xiàn)，以及抗病毒藥物價(jià)格昂貴，長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重副作用和耐藥病毒株出現(xiàn)

2、等原因，加之世界范圍內(nèi)的人口流動(dòng)和慢性乙型肝炎病毒感染進(jìn)展為肝硬化和肝癌高風(fēng)險(xiǎn)性，使得乙型肝炎病毒感染依然是危及世界人口健康的重要問(wèn)題之一。
　　乙型肝炎病毒感染的轉(zhuǎn)歸主要依賴(lài)與病毒和機(jī)體免疫系統(tǒng)之間的相互作用。因此研究機(jī)體免疫應(yīng)答對(duì)乙型肝炎病毒的清除機(jī)制，對(duì)尋求有效治療乙型肝炎病毒感染的靶點(diǎn)非常重要。在對(duì)乙型肝炎病毒的研究中發(fā)現(xiàn)，針對(duì)乙型肝炎病毒核心蛋白的抗體是感染過(guò)程中最早出現(xiàn)的抗體，幾乎所有乙肝感染者體內(nèi)都會(huì)出現(xiàn)而且可以在感

3、染者體內(nèi)終生存在。許多關(guān)于核心抗體單獨(dú)陽(yáng)性的乙肝感染者的研究顯示，這些患者體內(nèi)絕大部分的病毒處于低復(fù)制或隱匿感染狀態(tài)。在慢性乙型肝炎病毒感染患者體內(nèi)HBV處于低復(fù)制狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞免疫應(yīng)答減弱，而IgG型核心抗體還持續(xù)存在。因此我們推測(cè)持續(xù)存在的核心抗體有可能抑制乙型肝炎病毒的復(fù)制導(dǎo)致了這種低復(fù)制狀態(tài)。本研究利用純化的人源乙型肝炎病毒核心抗體IgG處理能夠穩(wěn)定表達(dá)HBV病毒的HepG2.2.15細(xì)胞，對(duì)核心抗體IgG抑制細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制的可

4、能機(jī)制進(jìn)行了初步探討。首先，我們利用免疫印跡技術(shù)證明核心抗體IgG能經(jīng)由抗原非特異途徑進(jìn)入肝細(xì)胞內(nèi)。其次利用激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù)和免疫印跡技術(shù)證明，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的核心抗體IgG能夠與核心抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物并堆積在細(xì)胞核膜的胞漿側(cè)，從而影響核心抗體亞細(xì)胞分布。由于核心蛋白在乙型肝炎病毒復(fù)制周期中發(fā)揮著多種重要作用。那么進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的核心抗體IgG分子結(jié)合了核心抗原必然會(huì)影響到核心抗原功能的發(fā)揮，從而抑制HBV的復(fù)制。第三，我們利用化學(xué)

5、發(fā)光微粒子免疫分析、實(shí)時(shí)定量熒光PCR技術(shù)和實(shí)時(shí)定量熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)對(duì)給予核心抗體處理96小時(shí)的HepG2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)上清中的乙型肝炎病毒表面抗原、e抗原，HBV DNA和細(xì)胞內(nèi)HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)和前基因組RNA(pgRNA)的濃度進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示:相對(duì)于對(duì)照組，核心抗體處理組72小時(shí)后表面抗原、e抗原以及細(xì)胞內(nèi)的pgRNA出現(xiàn)顯著下降，并具有明顯的時(shí)間劑量依賴(lài)性。與對(duì)照組相比，核心抗體IgG處理組培

6、養(yǎng)上清中的HBV DNA72小時(shí)時(shí)出現(xiàn)小幅上升，96小時(shí)出現(xiàn)顯著下降。而細(xì)胞內(nèi)的HBV cccDNA水平在96小時(shí)內(nèi)都沒(méi)有出現(xiàn)顯著改變。
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒核心抗體IgG除了作為經(jīng)典的乙型肝炎病毒感染的血清學(xué)標(biāo)志物外，還能夠抑制細(xì)胞內(nèi)乙型肝炎病毒的復(fù)制。并初步證明了進(jìn)入肝細(xì)胞的核心抗體抑制病毒復(fù)制的機(jī)制可能是通過(guò)干擾核心蛋白在病毒復(fù)制中的作用來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本課題為更全面的了解乙型肝炎病毒與機(jī)體免疫系統(tǒng)相互作用以及乙型肝炎病