加味壽胎顆粒抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的實驗研究.pdf

1、目的：評價基于補腎透邪法的加味壽胎顆粒的毒性程度；觀察加味壽胎顆粒含藥血清的體外抗乙型肝炎病毒的效果和作用，為進一步開展臨床研究及進行加味壽胎顆粒的抗病毒機制研究，提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法：以MTT法檢測藥物在體外對HepG2.2.15細(xì)胞的生長抑制作用，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）檢測HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度。用定量PCR法檢測不同處理組HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBV DNA含

2、量。
　　1.制備加味壽胎顆粒，以其不同濃度溶液灌養(yǎng)SD大鼠6天，抽血制備含藥血清。
　　2.培養(yǎng)、傳代HepG2.2.15細(xì)胞，接種于96孔細(xì)胞板，以不同濃度加味壽胎顆粒含藥血清及無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)9天，以MTT法判斷藥物細(xì)胞毒作用，計算50％毒性濃度及最大無毒濃度。
　　3.以加味壽胎顆粒含藥血清及無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)HepG2.2.15細(xì)胞，分別于3、6、9天收集細(xì)胞上清液，于3、6天換藥。以ELLISA法檢測HepG

3、2.2.15細(xì)胞上清液中HBsAg和HBeAg含量，計算50%藥物抑制濃度和治療指數(shù)。
　　4.用定量PCR法檢測不同處理組HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBV DNA含量，觀察不同濃度不同作用時間加味壽胎顆粒含藥血清對于HBV DNA復(fù)制的抑制效果。
　　結(jié)果：
　　1.成功制備加味壽胎顆粒含藥血清并以之培養(yǎng)HepG2.2.15細(xì)胞，以MTT法操作并算出50%毒性濃度(CD50)=6.79mg/(g·d)，最大無毒

4、濃度(CD0)=1.47mg/(g·d)。
　　2.以ELLISA法檢測HepG2.2.15細(xì)胞上清液中HBsAg和HBeAg含量滴度較陰性對照組低有統(tǒng)計學(xué)意義P<0.05，計算出50%藥物抑制濃度(IC50)，加味壽胎顆粒含藥血清培養(yǎng) HepG2.2.15細(xì)胞3天時其 HBsAgIC50=0.575mg/(g·d)；6天IC50=0.436mg/(g·d)；IC50=0.436mg/(g·d)；9天時IC50=0.316mg/(

5、g·d)。其HBeAg3天時IC50=1.374mg/(g·d)；6天時IC50=1.15mg/(g·d)；9天時 IC50=0.729mg/(g·d)。
　　治療指數(shù)（TI）
　　含藥血清作用于HepG2.2.15細(xì)胞第九天時對HBsAg的治療指數(shù)TI=21.49，含藥血清作用于HepG2.2.15細(xì)胞第九天時對HBeAg的治療指數(shù)TI=9.313以定量PCR法測量細(xì)胞上清液中HBVDNA含量。加味壽胎顆粒各組含藥血清對H

6、epG2.2.15細(xì)胞作用6d時1.45mg/(g?d)濃度組及9d時0.725-1.45mg/(g?d)濃度組后上清液中HBV DNA含量與空白對照組比較，有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。
　　以時間線比較1.45mg/(g?d)濃度組抑制率變化，3、6、9天抑制率分別為36.57%、51.61%、66.00%。
　　結(jié)論：
　　1.加味壽胎顆粒給藥濃度不大于1.47mg/(g·d)時，含藥血清于HepG2