地塞米松對(duì)脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元樹突可塑性的影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)主要采用霍亂毒素B亞單位結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶(CB-HRP)逆行標(biāo)記、顯微描繪管(Camera Lucida)圖象描繪和體視學(xué)測(cè)量的方法，分析比目魚肌(慢肌)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群和趾長(zhǎng)伸肌(快肌)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突分布和長(zhǎng)度的變化；探討嫌高爾基樹突(GBD)與比目魚肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群、趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群之間的關(guān)系；探討地塞米松對(duì)比目魚肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群、趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突的影響。 方法：1.選用36只生后30天的雄性Wistar

2、大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。18只大鼠每日肌注生理鹽水作為相應(yīng)對(duì)照；另18只每日分別肌注地塞米松(1mg/kg)，其中6只至生后40天(P30-40)、12只至生后60天(P30-60)。P30-60地塞米松組及相應(yīng)對(duì)照各6只經(jīng)灌注固定后，取脊髓腰膨大節(jié)段作冰凍切片，以高爾基銀染法染色；余者處死前3天，將霍亂毒素B亞單位結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶注射于左側(cè)趾長(zhǎng)伸肌和右側(cè)比目魚肌，經(jīng)灌注固定后，取脊髓腰膨大節(jié)段作冰凍切片，以Mesulam-TMB法呈色。采

3、用顯微描繪管繪制上述兩種染色切片的樹突分布圖，以體視學(xué)測(cè)量法計(jì)算白質(zhì)外側(cè)索樹突面密度和計(jì)算運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突的相對(duì)平均長(zhǎng)度。2.選用10只生后60天的雄性Wistar大鼠，以Western blot方法對(duì)比目魚肌、趾長(zhǎng)伸肌糖皮質(zhì)激素受體蛋白進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1.高爾基染色： 對(duì)照組肌注生理鹽水P30-60的大鼠，脊髓灰白質(zhì)分界明顯，灰質(zhì)內(nèi)可見神經(jīng)元胞體及樹突，白質(zhì)內(nèi)未見樹突存在；實(shí)驗(yàn)組肌注地塞米松P30-6

4、0的大鼠脊髓灰質(zhì)內(nèi)，白質(zhì)內(nèi)仍未見神經(jīng)元樹突；利用體視學(xué)測(cè)量方法測(cè)得的神經(jīng)元樹突相對(duì)平均長(zhǎng)度對(duì)照組為5360.37±452.39μm，實(shí)驗(yàn)組為8650±2367.04μm，P＜0.01。比對(duì)照組大鼠增加了約61.36％。 2.TMB成色： 1)與高爾基染色切片相比，霍亂毒素B亞單位結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶染色切片的脊髓白質(zhì)外側(cè)索，可見較多的白質(zhì)樹突，甚至達(dá)軟膜下的樹突存在，即嫌高爾基樹突；而高爾基染色切片則未見這些樹突的存在。

5、 2)P30-4O、P30-60對(duì)照組，趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突主要沿灰白質(zhì)交界處呈背腹相反走行，向白質(zhì)外側(cè)及腹外側(cè)方向延伸的樹突很少。與之相比，比目魚肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突的分布范圍較廣，外側(cè)索白質(zhì)樹突豐富，且多超過(guò)白質(zhì)三分之二?？梢娷浤は聵渫淮嬖凇30-40、P30-60實(shí)驗(yàn)組的大鼠，可見趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群白質(zhì)外側(cè)索樹突多于對(duì)照組，多數(shù)樹突超過(guò)白質(zhì)的三分之二，甚至可達(dá)軟膜下。P30-40、P30-60實(shí)驗(yàn)組大鼠白質(zhì)外側(cè)索的面密

6、度明顯高于相應(yīng)對(duì)照組，分別為66.07％，29.89％，P30-40對(duì)照組1.1 2±0.60，P30-40實(shí)驗(yàn)組.1.86±0.84，P＜0.01；P30-60對(duì)照組1.84±0.90，P30-60實(shí)驗(yàn)組2.39±0.97，P＜0.01。P30-40、P30-60實(shí)驗(yàn)組比目魚肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突與P30-40、P30-60對(duì)照組相比外側(cè)索白質(zhì)樹突面密度無(wú)明顯區(qū)別，P30-40對(duì)照組1.04±0.64，P30-40實(shí)驗(yàn)組1.01±0.66

7、，P＞0.05；P30-60對(duì)照組1.92±0.78，P30-60實(shí)驗(yàn)組1.90±1.15，P＞0.05。P30-40、P30-60實(shí)驗(yàn)組大鼠趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突相對(duì)平均長(zhǎng)度比P40、P60對(duì)照組大鼠明顯增長(zhǎng)約30.51％、92.54％，P30-40對(duì)照組9234.78±4792.60μn，P30-40實(shí)驗(yàn)組12052.07±6725.04μm；P30-60對(duì)照組7100.19±3197.24μm，P30-60實(shí)驗(yàn)組13671.31

8、±5089.73μm，P＜0.01：但地塞米松對(duì)趾長(zhǎng)伸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突生長(zhǎng)的這種促進(jìn)作用在比目魚肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元群樹突上表現(xiàn)不明顯，P30-40對(duì)照組10971.61±6426.26μm，P30-40實(shí)驗(yàn)組12894.02±7322.21μm，P＞0.05；P30-60對(duì)照組11801.71±5380.82μm，P30-60實(shí)驗(yàn)組15608.16±6509.27μm，比對(duì)照組增加了32.26％，P＜0.01。 3.Western blot

9、結(jié)果： 用美國(guó)UVP公司LabWorks 4.5軟件對(duì)Western條帶進(jìn)行定量分析比目魚肌、趾長(zhǎng)伸肌的糖皮質(zhì)激素受體蛋白含量，趾長(zhǎng)伸肌中糖皮質(zhì)激素受體蛋白含量高于比目魚肌，糖皮質(zhì)激素受體與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值在趾長(zhǎng)伸肌組大鼠為0.0906±0.0094，比目魚肌組大鼠為0.0367±0.004.5，P＜0.05，兩組相比，有顯著性差異。 結(jié)論： 1.嫌高爾基樹突(GBD)的確存在；支配張力性肌肉