外源性bFGF對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和DRG感覺(jué)神經(jīng)元CGRP變化的影響.pdf

1、目的：
　　 探討坐骨神經(jīng)損傷后，外源性堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）對(duì)坐骨神經(jīng)損傷局部、對(duì)應(yīng)的背根神經(jīng)節(jié)（DRG）、脊髓后角和脊髓前角神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)和CGRP變化的影響，為周圍神經(jīng)損傷后再生的分子機(jī)制提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)，也為臨床治療周圍神經(jīng)損傷提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 成年雄性Wistar（78只）大鼠隨機(jī)分成正常組、陽(yáng)性對(duì)照組（單側(cè)坐骨神經(jīng)損傷建立大鼠坐骨神經(jīng)損傷模型）、bFGF組（單側(cè)坐骨神經(jīng)損傷

2、，損傷后局部給bFGF，及術(shù)后隔日術(shù)側(cè)腓腸肌注射bFGF）。大鼠分別存活1d、3d、7d、14d、21d和28d，在各時(shí)間點(diǎn)灌注固定，取與坐骨神經(jīng)對(duì)應(yīng)的L4-6脊髓節(jié)段和相應(yīng)的背根神經(jīng)節(jié)（L4-6）以及損傷局部的坐骨神經(jīng)，冰凍連續(xù)切片，然后分別用免疫熒光、免疫組化及尼氏染色等方法分別觀察坐骨神經(jīng)損傷局部、DRG（L4-6）、脊髓后角（L4-6）和脊髓前角（L4-6）神經(jīng)元、神經(jīng)纖維的變化，CGRP免疫陽(yáng)性細(xì)胞和纖維的變化以及CGRP的積

3、分光密度值和前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元平均直徑的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1、bFGF對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后脊髓前角（L4-6）運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的影響
　　 （1）Nissl染色坐骨神經(jīng)損傷后可見(jiàn)術(shù)側(cè)前角（L4-6）有些外側(cè)群運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元呈圓形腫脹，核周Nissl小體開(kāi)始溶解，并可見(jiàn)明顯的胞核移位，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)有空泡變，一直持續(xù)到術(shù)后7d。術(shù)后14dNissl小體開(kāi)始恢復(fù)，術(shù)后21d可見(jiàn)多數(shù)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元Nissl小體重新出現(xiàn)，染色較深；術(shù)后

4、28d與正常組接近。坐骨神經(jīng)損傷局部給予bFGF，bFGF能促進(jìn)Nissl小體溶解后的恢復(fù)。bFGF組，損傷后1d術(shù)側(cè)前角（L4-6）外側(cè)群部分運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元開(kāi)始腫脹，并可見(jiàn)有Nissl小體溶解消失但不如陽(yáng)性對(duì)照組明顯，沒(méi)見(jiàn)到明顯的核移位，一直持續(xù)到損傷后7d；術(shù)后14d可見(jiàn)大量Nissl小體再生使細(xì)胞染色較深；術(shù)后21d術(shù)側(cè)前角前外側(cè)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的形態(tài)和平均直徑與正常組接近，對(duì)側(cè)前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元未見(jiàn)明顯變化。（2）CGRP在脊髓前角（L4-6

5、）的表達(dá)變化正常組動(dòng)物脊髓前角（L4-6）內(nèi)可見(jiàn)有CGRP免疫陽(yáng)性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，免疫反應(yīng)產(chǎn)物呈顆粒狀或均質(zhì)狀分布于胞質(zhì)中，胞核未見(jiàn)標(biāo)記，主要見(jiàn)于脊髓前角的外側(cè)群神經(jīng)元，也有一些脊髓前角內(nèi)側(cè)群神經(jīng)元呈CGRP陽(yáng)性。坐骨神經(jīng)損傷后1d可引起L4-6前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元CGRP的表達(dá)增加，術(shù)后7d達(dá)峰值，隨后緩慢下降，至術(shù)后21d接近正常。bFGF能促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后L4-6前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元CGRP的合成。bFGF組術(shù)后1d術(shù)側(cè)前角（L4-6）外側(cè)群運(yùn)

6、動(dòng)神經(jīng)元呈CGRP陽(yáng)性且染色較深；繼而前角（L4-6）外側(cè)群CGRP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目增多且染色更深，與對(duì)照組相比有明顯差異；術(shù)后14d前角（L4-6）外側(cè)群CGRP陽(yáng)性細(xì)胞染色明顯變淺，到28d接近正常。
　　 2、bFGF對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后脊髓后角CGRP陽(yáng)性纖維的影響正常組脊髓后角CGRP免疫陽(yáng)性纖維主要位于后角RexedⅠ和Ⅱ板層，也見(jiàn)于RexedⅢ和Ⅳ板層及Lissauer’s束，有許多粗細(xì)不等的CGRP陽(yáng)性纖維從RexedⅠ

7、、Ⅱ板層投射到RexedⅢ和Ⅳ板層。坐骨神經(jīng)損傷后可引起脊髓后角（L4-6）CGRP陽(yáng)性纖維密度降低。坐骨神經(jīng)損傷后術(shù)側(cè)脊髓后角（L4-6）CGRP陽(yáng)性纖維的密度較正常組明顯下降（P<0.05），主要見(jiàn)于RexedⅠ和Ⅱ板層；術(shù)后7dCGRP陽(yáng)性纖維密度降至最低，僅見(jiàn)于RexedⅠ、Ⅱ板層；隨后CGRP陽(yáng)性纖維增多，但術(shù)后28dCGRP陽(yáng)性纖維仍未達(dá)到正常水平。bFGF能促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后脊髓后角（L4-6）CGRP陽(yáng)性纖維的恢復(fù)。bF

8、GF組術(shù)后1 d，CGRP陽(yáng)性纖維在RexedⅠ、Ⅱ板層所占區(qū)域較正常組明顯減少（P<0.05），染色也有所下降；術(shù)后7dCGRP陽(yáng)性纖維僅見(jiàn)于RexedⅠ、Ⅱ板層，且密度下降到最低：第14dCGRP陽(yáng)性纖維明顯增多，灰質(zhì)后連合處也可見(jiàn)大量CGRP陽(yáng)性纖維；第21 dCGRP陽(yáng)性纖維進(jìn)一步增多，見(jiàn)于RexedⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ板層和灰質(zhì)后連合處；術(shù)后28dCGRP陽(yáng)性纖維的染色更明亮。
　　 3、bFGF對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后背根感覺(jué)神經(jīng)

9、元的影響（1）Nissl染色坐骨神經(jīng)損傷后Nissl染色可見(jiàn)DRG內(nèi)一些感覺(jué)神經(jīng)元Nissl小體開(kāi)始溶解，DRG（L4-6）神經(jīng)元胞體腫脹，隨后有些DRG（L4-6）神經(jīng)元胞質(zhì)中幾乎見(jiàn)不到Nissl小體；術(shù)后14d有些DRG（L4-6）神經(jīng)元Nissl小體開(kāi)始恢復(fù)染色呈深藍(lán)色；至28dDRG細(xì)胞數(shù)目仍未達(dá)到正常水平。bFGF能促進(jìn)坐骨神經(jīng)損傷后DRG（L4-6）中小型神經(jīng)元Nissl小體溶解恢復(fù)。bFGF組術(shù)后也有DRG（L4-6）神經(jīng)

10、元Nissl小體溶解消失；術(shù)后14d中小型細(xì)胞數(shù)目較陽(yáng)性對(duì)照組明顯增加（P<0.05），且染色更深；術(shù)后21 d細(xì)胞數(shù)目與正常組接近，DRG（L4-6）神經(jīng)元呈深藍(lán)色，但bFGF對(duì)大型感覺(jué)神經(jīng)元作用不明顯。（2）DRG內(nèi)CGRP的表達(dá)變化正常組動(dòng)物DRG內(nèi)可見(jiàn)大量以中小型細(xì)胞為主的CGRP免疫陽(yáng)性神經(jīng)元，但也可見(jiàn)一些大型感覺(jué)神經(jīng)元呈CGRP陽(yáng)性，CGRP呈顆粒狀均勻分布在胞漿中，細(xì)胞核未見(jiàn)標(biāo)記，也可見(jiàn)到一些CGRP免疫陽(yáng)性的神經(jīng)纖維。坐

11、骨神經(jīng)損傷可引起DRG（L4-6）CGRP合成減少，坐骨神經(jīng)損傷后術(shù)側(cè)DRG（L4-6）內(nèi)中小型細(xì)胞CGRP積分光密度值術(shù)后1d就明顯低于正常組（P<0.05），一直到第7d降至最低，以后開(kāi)始升高，但到第28d時(shí)仍明顯少于正常組；CGRP陽(yáng)性的大型細(xì)胞數(shù)目術(shù)后明顯減少，其細(xì)胞數(shù)目在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中沒(méi)有明顯變化且一直明顯低于正常組。bFGF能促進(jìn)DRG（L4-6）CGRP合成的恢復(fù)，坐骨神經(jīng)損傷后3d，術(shù)側(cè)DRG（L4-6）內(nèi)中小型細(xì)胞CG

12、RP積分光密度值明顯低于正常組，第7d與陽(yáng)性對(duì)照組類似都明顯低于正常組；坐骨神經(jīng)損傷后14d，CGRP的表達(dá)有所增加，至第21d與正常組接近，明顯高于陽(yáng)性對(duì)照組。bFGF組術(shù)側(cè)DRG（L4-6）大型神經(jīng)元的數(shù)目和CGRP積分光密度值在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均明顯低于正常組（P<0.05），bFGF組與陽(yáng)性對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異。
　　 4、bFGF對(duì)坐骨神經(jīng)損傷局部CGRP陽(yáng)性纖維的影響正常坐骨神經(jīng)未見(jiàn)或僅見(jiàn)少量CGRP陽(yáng)性纖維，坐骨神

13、經(jīng)損傷后可見(jiàn)局部坐骨神經(jīng)內(nèi)CGRP陽(yáng)性纖維增加，坐骨神經(jīng)損傷后1d，陽(yáng)性對(duì)照組未見(jiàn)CGRP陽(yáng)性纖維在損傷局部表達(dá)；術(shù)后3d在損傷局部可見(jiàn)有大量粗細(xì)不等的斷裂的CGRP陽(yáng)性纖維；第7d較第3d明顯減少；術(shù)后14d僅見(jiàn)有極少量的CGRP陽(yáng)性纖維；第21 d和28d在損傷局部幾乎見(jiàn)不到CGRP陽(yáng)性纖維。bFGF組術(shù)后1 d在坐骨神經(jīng)損傷局部可見(jiàn)大量粗細(xì)不等的斷裂的CGRP陽(yáng)性纖維；術(shù)后3d，在損傷局部依然可見(jiàn)大量CGRP陽(yáng)性纖維；術(shù)后7d與3

14、d比CGRP陽(yáng)性纖維明顯減少；術(shù)后14d、21d和28d幾乎見(jiàn)不到CGRP陽(yáng)性纖維。
　　 結(jié)論：
　　 1、坐骨神經(jīng)損傷可引起脊髓前角（L4-6）外側(cè)群運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元發(fā)生Nissl小體溶解、對(duì)內(nèi)側(cè)群神經(jīng)元無(wú)影響：坐骨神經(jīng)損傷也可引起DRG（L4-6）感覺(jué)神經(jīng)元Nissl小體溶解。
　　 2、坐骨神經(jīng)損傷后可引起脊髓前角（L4-6）外側(cè)群運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元CGRP合成增加，DRG（L4-6）部分大中小型感覺(jué)神經(jīng)元CGRP合成