腎上腺惡性腫瘤中新型分子靶點(diǎn)的篩選及其意義.pdf

1、目的：
　　新生血管形成是腫瘤發(fā)生發(fā)展中必不可少的步驟之一，與腫瘤形成、侵襲、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)有著密切的關(guān)系。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)與血管內(nèi)皮生長因子受體2（vascular endothelial growth factor receptor-2，VEGFR-2）結(jié)合后，激活后者介導(dǎo)的酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞增生，增加血管通透性，導(dǎo)致新的血管生成；類肝

2、素酶-1（Heparanase-1，HPA-1）通過釋放細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix，ECM)和基底膜(basement membrane，BM)上硫酸乙酰肝素（HS）側(cè)鏈結(jié)合的新生血管生長因子(如 bFGF，VEGF，PDG等)，促使 bFGF受體結(jié)合、二聚體形成和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)間接促進(jìn)新生血管生成。兩者在腎上腺皮質(zhì)腫瘤中的表達(dá)及其對血管生成的作用研究不多，本研究通過免疫組化及形態(tài)定量分析，分別檢測良性腎上腺皮質(zhì)腺

3、瘤和惡性腎上腺皮質(zhì)癌中VEGF、VEGFR-2和HPA-1的表達(dá)情況，并用CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，定量檢測微血管密度(microvessel density，MVD)的表達(dá)，結(jié)合臨床資料，探討它們在腎上腺皮質(zhì)腫瘤發(fā)生、發(fā)展及血管形成中的意義。
　　方法：
　　1、選取上海瑞金醫(yī)院1986年到2010年間手術(shù)切除且有完整臨床和病理資料的腎上腺皮質(zhì)腫瘤標(biāo)本44例，將標(biāo)本分為良性腎上腺皮質(zhì)腺瘤（良性組）20例，ACC（惡性組）2

4、4例。
　　2、免疫組化標(biāo)記采用間接法，EnVisionTM+檢測系統(tǒng)。
　　3、 HPA-1、VEGFR-2和 VEGF采用半定量計(jì)數(shù)法進(jìn)行評分，以細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占比例兩種指標(biāo)的積分之和作為判斷陽性或陰性的依據(jù)，若兩種積分之和大于3分則表達(dá)為陽性，小于或等于3分則為陰性。腫瘤內(nèi)MVD計(jì)數(shù)：在低倍物鏡下選取高血管密度區(qū)，之后在高倍鏡(×400)下計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)被CD34染成棕黃色的血管數(shù)，取其平均值作為該例腫瘤的M

5、VD值。
　　4、比較并分析良、惡性腎上腺皮質(zhì)腫瘤組織之間 VEGF、VEGFR-2、HPA-1的高、低表達(dá)率及MVD的區(qū)別。
　　結(jié)果：
　　1、 HPA-1在 ACC組中的表達(dá)為91.67％(22/24)，良性組中為15.00%(3/20)，ACC組與良性組之間 HPA-1的表達(dá)有極顯著性差異（P<0.01）；VEGF在ACC組中呈高表達(dá)(17/24，70．83％)，在良性組中表達(dá)較低(5/20，25.00%)，A

6、CC組與良性組之間VEGF的表達(dá)有顯著性差異（P<0.05）；VEGFR-2在 ACC組中呈高表達(dá)(19/24，79.17%)，在良性組中表達(dá)較低(5/20，25.00%)，兩者之間有顯著性差異（P<0.05）。
　　2、 MVD在 ACC組中的表達(dá)為(84.70±12.44)，顯著高于良性組(21．05±8．07)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、 Spearman等級相關(guān)性分析顯示，VEGF的表達(dá)與MVD呈

7、正相關(guān)(rs=0.834，P<0.01)，HPA-1的表達(dá)與MVD也呈正相關(guān)(rs=0.812，P<0.01)，提示HPA-1和VEGF均是參與調(diào)控ACC中新生血管形成的功能因子。
　　結(jié)論：
　　HPA-1、VEGFR-2和 VEGF在腎上腺皮質(zhì)癌組織中的蛋白表達(dá)高于皮質(zhì)腺瘤組織，且HPA-1、VEGF的表達(dá)與MVD間呈正相關(guān)，提示HPA-1及VEGF在腎上腺皮質(zhì)癌的血管形成和腫瘤生長中起重要作用。
　　目的：

8、>　　通過檢測熱休克蛋白-90（HSP90）和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子-3（STAT3）在良、惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)情況，探討HSP90和STAT3在早期診斷惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的價(jià)值，為鑒別嗜鉻細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為提供依據(jù)。
　　方法：
　　選取上海瑞金醫(yī)院1986年到2010年間手術(shù)切除且有完整臨床和病理資料的腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤標(biāo)本94例，將標(biāo)本分為良性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（良性組）76例，惡性嗜鉻細(xì)胞瘤（惡性組）18例。免疫組織化學(xué)

9、方法檢測94例標(biāo)本中HSP90和STAT3的表達(dá)。比較良、惡性腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤組織之間HSP90和STAT3的高、低表達(dá)率，并分析HSP90和STAT3聯(lián)合診斷惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的效用。采用蛋白免疫印跡法檢測 HSP90和STAT3在24例手術(shù)標(biāo)本（包括10例良性嗜鉻細(xì)胞瘤，7例惡性嗜鉻細(xì)胞瘤和7例正常腎上腺組織）中的表達(dá),并進(jìn)行性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、HSP90在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中表達(dá)率為66.67%(12/18；9

10、5%CI44.89%to88.45%），在良性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)率為22.37%(17/76;95%CI13.00%to31.74%)，在正常腎上腺髓質(zhì)組織中無表達(dá)，惡性嗜鉻細(xì)胞瘤組與良性嗜鉻細(xì)胞瘤組之間HSP90的表達(dá)存在顯著性差異(p=0.001)；HSP90診斷惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的陽性預(yù)測值為0.41(95% CI0.23 to0.61)。
　　2、STAT3在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中表達(dá)率為83.33%(15/18;95%CI66.1

11、1%to100.55%)，在良性嗜鉻細(xì)胞瘤中的表達(dá)率為26.32%(20/76;95%CI16.42%to36.22%)，在正常腎上腺髓質(zhì)組織中無表達(dá)，惡性嗜鉻細(xì)胞瘤組與良性嗜鉻細(xì)胞瘤組之間STAT3的表達(dá)存在顯著性差異(p<0.001)；STAT3診斷惡性嗜鉻細(xì)胞瘤的陽性預(yù)測值為0.44(95% CI0.26 to0.60)。
　　3、Western Blot分析結(jié)果顯示HSP90和STAT3在惡性嗜鉻細(xì)胞瘤中的蛋白表達(dá)水平遠(yuǎn)高