張應(yīng)力刺激對(duì)大鼠髁突軟骨細(xì)胞col-Ⅱ和AGG mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、張應(yīng)力刺激對(duì)大鼠髁突軟骨細(xì)胞c01Ⅱ和AGGmRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究。摘要目的：髁突軟骨是正畸臨床上功能矯形治療的主要“靶點(diǎn)”之一，在矯形力的作用下其能否發(fā)生適應(yīng)性改建在很大程度上決定著功能矯形治療的成敗，一直被國(guó)內(nèi)外學(xué)者所關(guān)注。我們的實(shí)驗(yàn)先對(duì)SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，探討周期性張應(yīng)力對(duì)髁突軟骨細(xì)胞主要細(xì)胞外基質(zhì)II型膠原(夠pe—IIcollagenCol—II)和聚集蛋白聚糖(aggrecanAGG)合成的影響

2、，為治療給予一定理論上的依據(jù)。方法：@SD大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細(xì)胞體外環(huán)境培養(yǎng)與細(xì)胞鑒定：取2周齡的SD大鼠20只斷頸處死后應(yīng)用機(jī)械分離酶消化聯(lián)合法分離雙側(cè)髁突軟骨細(xì)胞進(jìn)行原代體外培養(yǎng)，甲苯胺藍(lán)染色證明所培養(yǎng)的細(xì)胞合格。②周期性張應(yīng)力刺激模型建立與ColII、AGGmRNA半定量分析：采用細(xì)胞牽張加力儀器對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞(第3代)分別加力Oh、1h、6h、12h和24h的周期性張應(yīng)力，應(yīng)力拉伸率為10％1HZ。加過(guò)力后將不同加力組的細(xì)

3、胞非別放置，提取加力細(xì)胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)測(cè)定主要細(xì)胞外基質(zhì)C01II和AGG表達(dá)變化情況。結(jié)果：①采用機(jī)械分離酶化學(xué)消化聯(lián)合法獲得數(shù)量足夠的顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細(xì)胞，經(jīng)過(guò)細(xì)胞特異表型的觀察，確認(rèn)我們的細(xì)胞是想要的大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細(xì)胞。②半定量PCR顯示：與對(duì)照組(Oh組)相比，加力1h時(shí)C01II和AGG的表達(dá)均增加；加力6h時(shí)C01II和AGG表達(dá)均顯著增加(pD∞)；細(xì)胞加力的時(shí)間到12h時(shí)C01II和AGG表達(dá)

4、均開(kāi)始下降；當(dāng)加力至24h時(shí)二者表達(dá)量均顯著降低(pD∞)。結(jié)論：①采用機(jī)械酶化學(xué)聯(lián)合法完全可以消化得到大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁狀突軟骨細(xì)胞。②C01II、AGG等主要的細(xì)胞外的基質(zhì)明顯受到周期性張應(yīng)力刺激的影響。③適宜時(shí)間的張應(yīng)力刺激可增強(qiáng)C01II、AGG的合成有利于髁突軟骨細(xì)胞的增殖及改建；過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的張應(yīng)力刺激使基質(zhì)的合成受到明顯抑制不利于髁突軟骨的改建。研究生：鄭如松導(dǎo)師：楊竹麗教授袁曉副教授關(guān)鍵詞：功能矯形；張應(yīng)力；髁突軟骨；Ⅱ型膠原

5、；聚集蛋白聚糖目錄弓I言1第一章大鼠髁突軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)_力學(xué)刺激模型的構(gòu)建11主要材料與試劑：212大鼠髁突軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)及鑒定313髁突軟骨細(xì)胞力學(xué)模型構(gòu)建414實(shí)驗(yàn)結(jié)果5第二章張應(yīng)力刺激對(duì)大鼠髁突軟骨細(xì)胞Ⅱ型膠原和聚集蛋白聚糖mRNA表達(dá)影響21材料與方法822細(xì)胞接種與加載張應(yīng)力923倒置顯微鏡下加力細(xì)胞形態(tài)觀察1024RTPCR檢測(cè)C01II和AGGmRNA的表達(dá)量1125實(shí)驗(yàn)結(jié)果14討論19參考文獻(xiàn)25綜述一綜述參考文獻(xiàn)攻