胰島素樣生長(zhǎng)因子-Ⅰ對(duì)大鼠髁突軟骨細(xì)胞調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文 1 前言 前言 下頜骨不對(duì)稱(chēng)畸形是頜面部常見(jiàn)的畸形之一， 其成因主要是雙側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)受咬合干擾，受力不均最終導(dǎo)致下頜骨髁突改建[1]。 作為顳下頜關(guān)節(jié)的重要組成部分， 髁突軟骨處于顳下頜關(guān)節(jié)應(yīng)力敏感區(qū)， 是下頜骨發(fā)育重要的調(diào)節(jié)位點(diǎn)， 其發(fā)育異?？梢鹣骂M骨發(fā)育不足或發(fā)育過(guò)度， 導(dǎo)致頜面部畸形[2]。由于髁突軟骨的生長(zhǎng)速率及方向具有可塑性，并且決定著下頜骨生長(zhǎng)的長(zhǎng)度和高度， 使其一直成為研究熱點(diǎn)， 研究出生后下頜

2、骨髁突早期的生長(zhǎng)發(fā)育對(duì)于探討各種頜面部畸形的發(fā)病機(jī)制有著重要的臨床指導(dǎo)意義。 1987 年 Karlberg[3]提出了 ICP（infancy-childhood-puberty）生長(zhǎng)模型，它是通過(guò)人群連續(xù)生長(zhǎng)指標(biāo)經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)分析得出的一個(gè)數(shù)理模型。 該模型將人的線(xiàn)性生長(zhǎng)分為三個(gè)連續(xù)、部分重疊的時(shí)期，即嬰兒期（妊娠中期-3~4 歲） 、兒童期（0.5 歲-青春期） 、青春期。 “嬰兒期”除了受營(yíng)養(yǎng)因素影響，和 IGFs 作用密切相關(guān)[4]

3、， “兒童期”基本反映的是生長(zhǎng)激素對(duì)生長(zhǎng)的影響作用，而這個(gè)作用是通過(guò) IGF-Ⅰ軸來(lái)調(diào)節(jié)的。研究證實(shí) IGF-I 在胚胎期就已存在，Leger 等[5]發(fā)現(xiàn)出生后 5 天，人體內(nèi) IGF-I 水平顯著下降，且體重與血清 IGF-I 含量正相關(guān)，Juul等[6]認(rèn)為 IGF-I 水平持續(xù)下降至出生后六個(gè)月，此后緩慢增加，至青春期達(dá)到最高峰值。成年后，血清 IGF-I 含量及 IGF-I/IGFBP3 比值呈下降趨勢(shì)[4]。 與全身增長(zhǎng)速率

4、一致，髁突軟骨亦呈線(xiàn)性生長(zhǎng)。在生長(zhǎng)發(fā)育期，雙側(cè)髁突軟骨發(fā)育過(guò)度比較少見(jiàn)， 單側(cè)在兒童期的發(fā)生率最高， 因此它常引起髁突的真性發(fā)育異常[2]，而 IGF-I 在髁突軟骨生理性及病理性發(fā)育中的變化趨勢(shì)尚未見(jiàn)報(bào)道。 本課題選取 SD 鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，鼠類(lèi)的青春期緊接斷乳期，通常大鼠的生長(zhǎng)時(shí)間稍晚于小鼠，大鼠 13~16 天睜眼，睜眼后開(kāi)始少量啃咬固體食物，4~5 周時(shí)完全斷奶，12~14 周為快速生長(zhǎng)期，到 6 月時(shí)停止生長(zhǎng)。Gabriel 等

5、[7]提出 SD 大鼠青春前期在出生后 28~32 天之間，青春早期在 33~40 天，青春后期在 41~54天。因此綜合上述，本課題的研究對(duì)象選取出生后 1d、7d、14d、28d SD 大鼠的髁突軟骨， 代表嬰兒期-兒童期-青春前期的發(fā)育過(guò)程， 以此來(lái)探究 IGF-I 與出生上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文 3 從而分析 IGF-I 介導(dǎo)的 Bcl-2、Bax 信號(hào)通路與 MCC 細(xì)胞增殖、凋亡的關(guān)系，探討 IG IGF-I 介導(dǎo)的細(xì)胞凋

6、亡在 介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在髁突軟骨發(fā)育的 髁突軟骨發(fā)育的作用。 作用。 另一方面，在體外培養(yǎng)的髁突軟骨細(xì)胞中加入外源性重組 rIGF-I 引起髁突軟骨細(xì)胞內(nèi) IGF-I 表達(dá)上調(diào)后，應(yīng)用 real-time PCR 技術(shù)，檢測(cè) IGF-I 信號(hào)通路相關(guān)因子基因水平的量變，從而探討：1.不同發(fā)育階段， IGF-I 信號(hào)通路對(duì)髁突軟骨細(xì)胞增殖、 凋亡的影響程度及地位， 為以后下頜骨不對(duì)稱(chēng)畸形基因靶向治療時(shí)機(jī)的選擇提供依據(jù)； 2.橫向比較： I

7、GF-I 信號(hào)通路的激活后引起哪些下游相關(guān)激酶、靶蛋白的變化；3.尋找可能與 IGF-I 通路相互作用的其他蛋白。 通過(guò)研究 IGF-I 在髁突軟骨發(fā)育過(guò)程中可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制， 以及與其他蛋白的相互作用， 從而進(jìn)一步完善髁突軟骨細(xì)胞發(fā)育相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制圖譜， 有助于我們理解髁突軟骨的生長(zhǎng)與發(fā)育， 為以后力學(xué)加載下髁突軟骨內(nèi) IGF-I 信號(hào)的變化， 及與其他因子信號(hào)網(wǎng)絡(luò)交互關(guān)系的實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)， 以此探討髁突軟骨細(xì)胞內(nèi)力學(xué)傳導(dǎo)信號(hào)途