尖銳濕疣中PAR-1、β-catenin的表達(dá)及研究.pdf

1、背景和目的:
　　尖銳濕疣(condyloma acuminatum,CA)也稱生殖器疣(Genital wart),是最常見的性傳播疾病之一,其潛伏期長、發(fā)病率及復(fù)發(fā)率均很高。尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒(Human Papilloma virus,HPV)感染所致的皮膚粘膜良性增生性疾病,引起尖銳濕疣的常見病毒型別為HPV6、11、16、18型,其中16和18型又與宮頸癌的發(fā)生有密切相關(guān),故日益受到人們的重視。臨床上尖銳濕疣疣體生

2、長速度快,理化方法治療時(shí)極易出血,組織病理檢查也發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖,真皮毛細(xì)血管增多并伴有管腔擴(kuò)張,我們推測CA中存在某些促細(xì)胞增殖和血管生成的因素。我們在前期實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí)了多種與血管生長有關(guān)的因子如血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和轉(zhuǎn)化生長因子β1(Transforming growth factor beta,TGFβ1)等在CA中的過度表達(dá),證實(shí)了CA中存在

3、促血管生成的因素。蛋白酶激活受體( Protease-activated receptor1,PAR-1)是一種G蛋白偶聯(lián)受體,其功能逐漸引起人們的關(guān)注,已發(fā)現(xiàn)其有促進(jìn)細(xì)胞增殖與血管生成作用,并有穩(wěn)定VEGF mRNA的功能。Wnt/β-catenin是胚胎組織發(fā)育分化所必需的關(guān)鍵信號通路,我們前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CA中存在wnt-1蛋白高表達(dá),提示CA中存在wnt-1異常激活從而促進(jìn)細(xì)胞不斷增殖,β-連環(huán)素(β-catenin)是Wnt/β

4、-catenin信號通路中關(guān)鍵的下游效應(yīng)分子,明確其在CA中的作用十分重要。
　　本研究用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase-chain reaction, PCR)檢測了CA組織中HPV6/11、16/18型別,初步探討HPV基因型與CA之間的相關(guān)性,同時(shí)對CA組織進(jìn)行血管計(jì)數(shù)并檢測PAR-1和β-catenin的表達(dá)情況,意在探討它們在CA發(fā)生發(fā)展過程中的作用,為CA發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步闡明提供新的思路。
　　方法:

5、　　對28例CA病變組織行常規(guī)組織病理切片和HE染色并對其進(jìn)行血管計(jì)數(shù),采用免疫組化法檢測PAR-1和β-catenin蛋白的表達(dá),用PCR法檢測人乳頭瘤病毒(HPV)型別,用RT-PCR法檢測PAR-1 mRNA的表達(dá)情況,所有實(shí)驗(yàn)以17例正常包皮組織作為對照。
　　結(jié)果:
　　CA組織的血管數(shù)(20.81±9.09)比正常包皮組織(11.36±2.45)明顯增多(t=5.192,P<0.001)。CA組織中PAR-1 m

6、RNA平均表達(dá)水平(1.541±0.1280)顯著高于正常包皮對照組(0.728±0.214,t=7.26,P<0.001);CA皮損中PAR-1蛋白表達(dá)較正常人表皮中的表達(dá)顯著增強(qiáng)(X2=16.218,P<0.001),正常人表皮中僅在基底層弱陽性表達(dá),而在CA皮損中PAR-1的表達(dá)為基底層至角質(zhì)層下方。PAR-1蛋白表達(dá)跟血管數(shù)存在顯著正相關(guān)(r=0.823,P<0.001)。β-catenin在正常組中的表達(dá)均定位于細(xì)胞膜,為正常

7、表達(dá),6例(21.4％)CA皮損為細(xì)胞膜表達(dá)缺失,呈胞質(zhì)和/或胞核異常表達(dá),其異常表達(dá)率顯著高于正常組(X2=4.203,P<0.05)。PAR-1蛋白的陽性表達(dá)與β-catenin的異常表達(dá)存在正相關(guān)(P<0.05,r=0.101)。28例CA皮損中均可檢測出HPV DNA,其中HPV6/11型23例,HPV16/18型5例;而正常皮膚組織中HPV DNA均為陰性。HPV16/18的陽性表達(dá)與β-cat的異常表達(dá)存在高度正相關(guān)(P<0