胡桃楸內(nèi)生真菌的分離及高抗癌活性菌株篩選.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是指在其整個(gè)生活史或者生活史的某一階段生活在植物組織體內(nèi)的一類并不引起明顯病害癥狀的真菌。它們有著豐富多樣的具有廣泛生物學(xué)活性的代謝產(chǎn)物。從植物中分離獲得能夠產(chǎn)生活性物質(zhì)的內(nèi)生真菌菌株有著重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。胡桃楸(Juglans mandshurica Maxim)的樹皮、羽狀復(fù)葉、果實(shí)及果實(shí)外果皮都有很高的藥用價(jià)值。胡桃楸有抗腫瘤、消炎鎮(zhèn)痛、抗氧化等功用。目前對(duì)胡桃楸的抗腫瘤活性研究比較深入,但還沒有關(guān)于胡桃楸內(nèi)生真菌

2、的報(bào)道。本研究從胡桃楸樹皮中分離到14株內(nèi)生真菌,采用細(xì)胞毒篩選模型(MTT法)對(duì)這些內(nèi)生真菌發(fā)酵液的抗腫瘤活性進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明,有3株真菌的發(fā)酵液對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。以ITS1和ITS4為引物,對(duì)活性菌株FSNQ0002、FSNQ0004和FSNQ0011的ITS序列進(jìn)行了PCR擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行了測(cè)序,系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)FSNQ0002、FSNQ0004和FSNQ0011可以歸為木霉屬長(zhǎng)枝木霉(T

3、richoderma longibrachiatum)?；钚宰罡叩腇SNQ0002的發(fā)酵液對(duì)人肺癌細(xì)胞系SPC-A-1和人胃癌細(xì)胞系SGC都有很強(qiáng)的抑制作用,而對(duì)人正常肝細(xì)胞系HL-7702毒性較小。FSNQ0002發(fā)酵液體內(nèi)抗H22實(shí)驗(yàn)表明,FSNQ0002發(fā)酵液對(duì)體內(nèi)腫瘤抑制率為31.53%。用正丁醇萃取可以有效地富集發(fā)酵液中的有效成分,發(fā)酵液中有效成分經(jīng)65℃處理2h后活性仍然穩(wěn)定,這些特性為活性產(chǎn)物的分離純化和穩(wěn)定性研究打下了基