核桃與板栗內(nèi)生真菌分離、生防潛力菌株的篩選及其生物學(xué)特性.pdf

1、本文以健康的核桃與板栗組織為試材，采用組織分離法對(duì)其根、莖、葉、果實(shí)等不同部位的內(nèi)生真菌進(jìn)行了分離與純化，共得到內(nèi)生真菌64株，其中從核桃上分離到36株，板栗上分離到28株。本文首先對(duì)內(nèi)生菌的分離培養(yǎng)條件進(jìn)行了探索。最后確定表面消毒方法為:酒精浸泡30s，無(wú)菌水沖洗2-3次，升汞浸泡2-3min，無(wú)菌水沖洗2-3次，無(wú)菌濾紙吸干表面水分。分離內(nèi)生真菌的最佳培養(yǎng)基為PDA+鏈霉素培養(yǎng)基。將分離到的64株內(nèi)生真菌與五種供試病原真菌，楊樹腐爛

2、病菌（Valsa sordida）、灰霉病菌（Botrytis cinerea）、板栗疫病菌（Cryphonectria parasitica）、立枯絲核菌（Rhizoctoniasolani）、核桃炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）進(jìn)行了平板對(duì)峙試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果表明:有9種內(nèi)生真菌對(duì)上述五種病原菌的抑制率均值達(dá)到50％以上，其中有3種內(nèi)生真菌對(duì)每一種病原菌的抑制率都在50％以上。9種內(nèi)生真菌揮發(fā)性物

3、質(zhì)的抑菌試驗(yàn)結(jié)果顯示，其中有8種的揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)核桃炭疽病菌和板栗疫病菌都有抑制作用，而有一種對(duì)兩種供試病原菌的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。9種內(nèi)生真菌的液體培養(yǎng)發(fā)酵液對(duì)供試病原菌的菌絲生長(zhǎng)、核桃炭疽病菌分生孢子和板栗疫病菌分生孢子的萌發(fā)都有明顯的抑制作用。9種內(nèi)生菌中的核桃內(nèi)生菌的發(fā)酵液的溫室促生試驗(yàn)和大田防病試驗(yàn)結(jié)果表明:發(fā)酵液對(duì)核桃苗的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，在田間也能有效減輕核桃炭疽病的發(fā)生。發(fā)酵液經(jīng)乙酸乙酯萃取和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到的粗提物，對(duì)核桃炭

4、疽病菌和板栗疫病菌的抑菌作用更明顯。
　　 本文對(duì)部分內(nèi)生真菌進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的鑒定。
　　 對(duì)3種生防效果最優(yōu)秀的菌株，HL3R、HSE7和BR3進(jìn)行了生物學(xué)特性的研究，對(duì)今后的大規(guī)模培養(yǎng)以及菌劑開發(fā)具有指導(dǎo)意義。在麥芽糖培養(yǎng)基、查彼培養(yǎng)基、基本培養(yǎng)基上，3種真菌均在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)和基本培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)較好;3種真菌在15℃-35℃均能生長(zhǎng)，20℃-30℃時(shí)生長(zhǎng)較好，25℃時(shí)最適，生長(zhǎng)速率最快，

5、其中HSE7在30℃也能較好生長(zhǎng);蔗糖對(duì)三種內(nèi)生真菌的生長(zhǎng)有較明顯的促進(jìn)作用，其中BR3在乳糖為碳源的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)也較好;HSE7在含有無(wú)機(jī)氮源(NH4)2SO4和有機(jī)氮源丙氨酸的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好，HL3R在兩種無(wú)機(jī)氮源(NH4)2SO4和NH4NO3的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較好，而BR3在含有機(jī)氮源牛肉膏的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較快。3種真菌對(duì)pH的適應(yīng)范圍較很廣，在6～11的pH范圍內(nèi)都能生長(zhǎng)良好，相比之下，在中性偏堿性的環(huán)境中生長(zhǎng)最好;光周期對(duì)3種內(nèi)