整合素α-,V-β-,6-在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及生物學(xué)意義.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文整合素αβ在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及生物學(xué)意義姓名：楊波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：吳小華;單保恩20040301中丈摘要轉(zhuǎn)化侵襲中表達(dá)上調(diào)。其p 6 亞基特有的胞內(nèi)區(qū)結(jié)構(gòu)可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖擴(kuò)散。整合素a v l 3 6 作為粘附分子的一員，在細(xì)胞問(wèn)的粘附及增殖起重要作用，而對(duì)于在E M 中所起的作用研究甚少。為了探討旺v p 6 在E M 的發(fā)病機(jī)制中所起的作用，我們從蛋白及基因水平上觀察了a v

2、 l 3 6 在E M 的在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜及對(duì)照組非E M 在位子宮內(nèi)膜的表達(dá)情況。方法：選擇2 0 0 2 年1 2 月至2 0 0 3 年1 2 月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院婦產(chǎn)科經(jīng)腹腔鏡或開(kāi)腹手術(shù)及病理檢查確診的3 4 例E M 患者，和同期2 8 例行子宮全切的非E M 患者子宮內(nèi)膜為研究對(duì)象。采用美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正后內(nèi)異癥分期評(píng)分法( r - A F S ) 對(duì)E M 進(jìn)行分期。所有標(biāo)本術(shù)后立即置液氮驟凍( < 3 0 分鐘

3、) ，．8 0 。C 冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩? ．半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)( R T - P C R ) 方法檢測(cè)a v l 3 6 基因的表達(dá)。約o ．1 9 組織置于勻漿器中，加入變性液，快速于冰浴中勻漿，然后加醋酸鈉、水飽和酚、氯仿異戊醇4 。C 1 0 0 0 0 r p m 離心2 0 分鐘，水相上清，用異丙醇沉淀R N A 。乙醇洗滌后溶于D E P C 水，用紫外分光光度儀測(cè)其在2 6 0 n m 和2 8 0 n m 波長(zhǎng)的O

4、 D 值，以檢測(cè)R N A 的含量及純度。2 ％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其完整性，取2 u g 總R N A 用于R T - P C R 反應(yīng)。P C R產(chǎn)物在2 ％瓊脂糖凝膠上電泳。然后用凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，用1 3 _ a c t i n 作為內(nèi)參照。2 ．免疫組織化學(xué)方法進(jìn)行a v l 3 。蛋白定位，標(biāo)本進(jìn)行蠟塊包埋切片，3 ％甲醇稀釋的過(guò)氧化氫室溫孵育1 0 m i n ，以去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，1 0 ％正常山羊血清封閉非特