木欖內(nèi)生真菌的分離鑒定及其次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究.pdf

1、近年來(lái)，海洋微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究已經(jīng)成為國(guó)際科學(xué)家的研究熱點(diǎn)。由于其生長(zhǎng)環(huán)境復(fù)雜，造就了海洋微生物代謝方式獨(dú)特，能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、具有藥理活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物。紅樹(shù)林內(nèi)生真菌由于資源豐富，產(chǎn)生活性代謝產(chǎn)物能力強(qiáng)，已經(jīng)成為目前研究最全面的海洋真菌。
　　為了尋找結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物，本論文采用生物活性測(cè)試與化學(xué)成分分析集成的篩選方法，開(kāi)展了紅樹(shù)林內(nèi)生真菌的分離以及兩株紅樹(shù)林內(nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究工作。工作內(nèi)容包括：紅樹(shù)林內(nèi)生

2、真菌的分離篩選，生物活性測(cè)試、化學(xué)成分分析；內(nèi)生真菌的發(fā)酵、次級(jí)代謝產(chǎn)物的提取分離；化合物的結(jié)構(gòu)解析以及化合物的生物活性測(cè)試。
　　從采自廣東湛江的東寨港紅樹(shù)林保護(hù)區(qū)的紅樹(shù)林植物木欖(Bruguiear gymnorrhiza)莖中分離純化得到13株內(nèi)生真菌。通過(guò)生物與化學(xué)集成的篩選方法，發(fā)現(xiàn)66-2＃菌株具有較好的生物活性和較好的化學(xué)多樣性。通過(guò)分子生物學(xué)的鑒定方法確定該菌株為Penicillium sclerotiorum，并

3、確定該菌株為Talented菌株。
　　通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基的選擇，最終確定用生物麥芽培養(yǎng)基對(duì)Tale nted菌株進(jìn)行大規(guī)模發(fā)酵，得到發(fā)酵產(chǎn)物。通過(guò)薄層層析，硅膠柱層析，Sephadex-LH20凝膠柱色譜以及反向高效液相分離等手段，通過(guò)波譜解析并合理化理化常數(shù)從發(fā)酵產(chǎn)物中分離純化得到11個(gè)化合物：(+)-cyclopenol，verrucosidin，3-(dimethylaminomethyl)-1-(1,1-dimethyl-2-

4、propenyl)indole， deoxyverrucosidin， anacine，aurantiomide C，(22E)-ergosta-5,7,22-trien-3beta-ol，ergosterol peroxide， viridicatol，viridicatin，3-O-Methylviridicatin，其中(+)-cyclopenol為新化合物。
　　對(duì)另一株木欖內(nèi)生真菌 AGR-6＃菌的發(fā)酵產(chǎn)物通過(guò)各種分離手

5、段成功得到6個(gè)化合物：3R,4R-3,4,8-trihydroxy-1-tetralon， cyclo-(Tyr-Pro)，4-Hydroxybenzaldehyde，3-phenylacrylamide，flavasperone以及rubrofusarin B，其中，化合物3R,4R-3,4,8-trihydroxy-1-tetra lo n首次報(bào)道其晶體結(jié)構(gòu)。
　　對(duì)所得到的17個(gè)內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物進(jìn)行廣泛的生物活性測(cè)試，包括抗