發(fā)酵支原體和梨支原體誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡與多器官損傷實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 本研究旨在制備發(fā)酵支原體(Mycoplasma fermentans，Mf)和梨支原體(Mycoplasmapirum，Mpi)致死性感染免疫缺陷小鼠模型，探討支原體感染誘導(dǎo)的小鼠胸腺細(xì)胞凋亡與多器官損傷間的相關(guān)性，從而為臨床上艾滋病患者協(xié)同感染發(fā)酵支原體和梨支原體的治療提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.動(dòng)物模型的制備:103只6w齡清潔級ICR雌性小鼠（16～20g/只）隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組

2、和對照組，實(shí)驗(yàn)組分為2組:Mf感染免疫抑制組和Mpi感染免疫抑制組;對照組分為3組:Mf感染非免疫抑制組、NS對照組和NS空白組。
　　 1.1免疫缺陷模型的制備:隨機(jī)取小鼠隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg/kg/d，5次制成免疫缺陷模型。
　　 1.2感染模型的制備:Mf、Mpi感染免疫抑制組和Mf感染非免疫抑制組分別腹腔注射對數(shù)生長期支原體菌液，NS組分別腹腔注射相同劑量的無菌生理鹽水。各感染組在末次感染后8-12h、2

3、4-48h分批宰殺，無菌心臟采血，取血清進(jìn)行支原體分離培養(yǎng)，取各組小鼠胸腺、胰腺和小腸，觀察其病理形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 2.死亡率比較:觀察各組剩余小鼠存活數(shù)，比較死亡率。
　　 3.支原體的分離培養(yǎng):取各組小鼠血清以及胰腺、小腸、心、肺、肝和腎進(jìn)行支原體的分離培養(yǎng)。
　　 4.超微結(jié)構(gòu)觀察:取各時(shí)段小鼠胰腺、小腸、胸腺、心、肝、肺和腎，常規(guī)透射電鏡制樣，觀察其超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　 5.凋亡基因

4、的檢測:免疫組化法檢測各組小鼠胸腺細(xì)胞中Bax/Bcl-2和Fas/FasL兩組凋亡基因蛋白的表達(dá)，比較各組間差異。
　　 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行Fisher確切概率法分析、單因素方差分析和LSD檢驗(yàn)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.小鼠死亡率比較:Mf和Mpi感染免疫抑制組在感染后死亡率均為100％(12/12)，與NS組0％(0/19)以及Mf感染非免疫抑制組16.7％(2

5、/12)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.支原體分離再培養(yǎng):NS對照組未見支原體菌落，其余各感染組支原體分離培養(yǎng)均可見典型的“油煎蛋”樣陽性菌落，提示Mf或Mpi再培養(yǎng)陽性。
　　 3.超微結(jié)構(gòu)改變:Mf和Mpi感染免疫抑制組小鼠胸腺細(xì)胞12h時(shí)即發(fā)生超微結(jié)構(gòu)改變，至死亡時(shí)小鼠胸腺胞核嚴(yán)重固縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡，凋亡顯著，而Mf感染非免疫抑制組胸腺細(xì)胞凋亡相對較輕。Mf和Mpi感染免疫抑制組小鼠胰腺和小腸粘膜

6、12h即出現(xiàn)病理改變，直至死亡時(shí)出現(xiàn)多器官（胰腺、小腸粘膜、心、肝、肺和腎）嚴(yán)重?fù)p傷。
　　 4.凋亡基因的檢測:在特異性抗Bax/Bcl-2/Fas/FasL的免疫組化切片中，以胞漿及胞膜被染成棕黃色或棕褐色者為陽性細(xì)胞。Mf和Mpi感染免疫抑制組Bax陽性率相近，其陽性率均高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，Mf感染非免疫抑制組和NS對照組Bax陽性率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而各組的Bcl-2蛋白表達(dá)陽性

7、率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);兩種支原體感染各組的Bax/Bcl-2比值明顯高于對照組;Mf和Mpi感染免疫抑制組Fas/FasL表達(dá)升高，與對照組比較差異顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.Mf和Mpi感染免疫缺陷小鼠易引起多器官損傷和高致死率，機(jī)體的免疫缺陷狀態(tài)可增加對支原體的易感性。
　　 2.Mf和Mpi感染引起免疫缺陷小鼠早期胰腺和小腸粘膜損傷，可能是SIRS向MODS進(jìn)行性發(fā)展的誘導(dǎo)