發(fā)酵支原體、梨支原體大鼠致死性感染實驗研究.pdf

1、目的: 本實驗制備發(fā)酵支原體(Mycoplasma fermentans，Mf)、梨支原體(Mycoplasma pirum，Mpi)致死性感染免疫缺陷大鼠模型，探討其所致免疫缺陷大鼠快速死亡、多器官損傷以及血清細胞因子變化的相關(guān)性，從而為免疫缺陷患者合并Mf和Mpi感染的臨床治療提供理論與實驗依據(jù)。 方法: 對數(shù)生長期Mf、Mpi經(jīng)腹腔感染免疫缺陷大鼠和非免疫缺陷大鼠，計算致死率，觀察心、肝、肺、腎和腦等重要器

2、官超微結(jié)構(gòu)改變以及比較大鼠血清細胞因子變化，并分析它們之間的相關(guān)性。 1.培養(yǎng)基 改良的SP4(用于Mpe、Mpi、Mf以及W12等支原體的分離培養(yǎng))液體和固體培養(yǎng)基。 2.標準菌株來源 已知標準對照菌株Mf、Mpi和穿通支原體(Mycoplasma penetrans，Mpe)分別由東南大學(xué)醫(yī)學(xué)院流行病學(xué)教研室趙季文教授惠贈，而W12為本實驗室穿通支原體分離株。 3.實驗動物與分組 3.

3、1免疫缺陷大鼠模型的制備：隔日腹腔注射環(huán)磷酰胺，3次制成免疫缺陷模型。 3.2感染大鼠模型制備 3.2.1實驗組 免疫缺陷大鼠隨機分為4組(Mf、Mpi、Mpe及W12感染免疫缺陷組)，腹腔注射對數(shù)生長期相應(yīng)支原體菌液。 3.2.2對照組 免疫缺陷和正常大鼠分3組(NS免疫缺陷組、NS正常大鼠組及Mf感染正常大鼠組)，腹腔注射等劑量NS和Mf菌液。 4.大鼠血液及組織支原體的再培養(yǎng)

4、 各組大鼠均進行血液的普通培養(yǎng)以排除血液其他細菌的感染，以及心、肝、肺、腎和腦組織支原體再培養(yǎng)。 5.各組大鼠觀察及致死率比較 6.血清細胞因子檢測 各組心臟無菌采血分離血清，采用ELISA法檢測大鼠血清IL-10、TNF-α、IL-1β并IL-6，比較組間差異。 7.電鏡標本的制作與觀察 分別取死亡組大鼠的心、肝、肺、腎和腦等重要臟器組織經(jīng)2.5％戊二醛和1％鋨酸雙重固定，丙酮梯度脫水，Epon

5、-812環(huán)氧樹脂包埋，RMC-PT超薄切片機切片，半薄切片光鏡定位于組織實質(zhì)細胞部分，超薄切片經(jīng)鉛-鈾雙重染色，H-7500透射電鏡下觀察，拍片。 8.統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS13.0軟件對測量數(shù)據(jù)進行單因素方差分析和Fisher確切概率法進行數(shù)據(jù)處理。 結(jié)果: 1.大鼠血液及組織臟器支原體再培養(yǎng)結(jié)果 各支原體感染組及Mf感染的正常大鼠血液及組織中均各自分離到相應(yīng)的支原體，NS組大鼠均未分離到上述

6、支原體。 2.大鼠感染致死結(jié)果 Mf免疫缺陷和Mpi免疫缺陷組死亡率均為100％(12/12)，與NS組0％(0/7)和Mf正常大鼠28.6％(2/7)分別比較其差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。 3.血清細胞因子檢測比較 (1)免疫缺陷感染組(Mf、Mpe、W12)大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的含量明顯高于NS免疫缺陷組(P<0.01)。 (2)免疫缺陷感染組(Mf

7、、Mpi、Mpe、W12)大鼠血清TNF-α、IL-1β和IL-6的含量均明顯低于Mf感染正常大鼠組(P<0.01)，而IL-10的含量明顯高于Mf感染正常大鼠組(P<0.01)。 (3)Mf感染正常大鼠組血清TNF-α、L-1β和IL-6的含量明顯高于NS正常大鼠組(P<0.01)，而IL-10的含量明顯低于NS正常大鼠組(P<0.01)。 4.心、肝、肺、腎和腦超微結(jié)果改變 支原體感染免疫缺陷組大鼠死亡后各臟

8、器均出現(xiàn)相應(yīng)的病理改變，呈現(xiàn)多種器官的嚴重損害，表現(xiàn)為心肌纖維不同程度的溶解；肝臟炎性反應(yīng)明顯、肝細胞線粒體結(jié)構(gòu)破壞；肺泡空泡樣改變、炎性細胞浸潤；腎小管上皮細胞破壞、核固縮；腦組織細胞大面積水腫等，而Mf感染正常大鼠組器官超微結(jié)構(gòu)病變則較輕。 結(jié)論: 1.Mf、Mpi可引起免疫缺陷大鼠多器官損傷以及高致死率，其致病性與機體免疫系統(tǒng)狀態(tài)有著一定的相關(guān)性。免疫缺陷可以增加支原體的易感性。 2.Mf，Mpi感染后炎癥