解脲支原體體外抑制HeLa細胞增殖和誘導凋亡及TLR2表達相關研究.pdf

1、目的：
　　 本課題以Hela細胞作為宮頸柱狀上皮的細胞模型進行研究，用不同濃度UU1干預后，觀察細胞抑制率及凋亡情況，檢測細胞內TLR2蛋白表達情況，初步分析UU1對HeLa細胞的生長和凋亡的影響及UU1對HeLa細胞TLR2表達的影響，探討TLR2信號途徑與UU1致病關系。
　　 方法：
　　 1、培養(yǎng)HeLa細胞，UU1干預48h后，光學顯微鏡下觀察干預組與對照組細胞形態(tài)學變化;Hoechst熒光染色后，熒

2、光顯微鏡下觀察UU1干預細胞48h后細胞凋亡的情況。
　　 2、培養(yǎng)HeLa細胞，不同濃度UU1分別干預24h、48h、72h后，MTT比色法檢測細胞抑制情況，計算抑制率的差別，同時設置對照組和調零組，實驗重復3次。
　　 3、培養(yǎng)HeLa細胞，UU1干預48h后，用異硫氫酸熒光素(FITC)標記TLR2抗體對Hela細胞進行免疫熒光染色，觀察UU1干預組與非干預組細胞表面TLR2的表達情況;不同濃度的UU1干預HeLa

3、細胞24h、48h，Western blotting定量細胞中TLR2蛋白表達差別。
　　 結果：
　　 1、Hela細胞加入UU1作用48小時后，光鏡下細胞出現(xiàn)凋亡的特征性改變:細胞皺縮變形，細胞質致密濃縮，核仁消失，染色質斑塊狀聚集在核膜下，且出現(xiàn)細胞漂浮，貼壁細胞數(shù)目減少;Hoechst33258染色后，熒光顯微鏡下可見UU1干預組的細胞核致密濃染，折光性增強，并有凋亡小體形成。
　　 2、UU1對HeLa

4、細胞的生長有抑制作用，不同UU1濃度干預后的細胞抑制率，除24小時1×104濃度組外，其他各實驗組與對照組比較，差別均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且隨著UU1濃度的升高，細胞抑制作用增強。
　　 3、免疫熒光染色顯示UU1作用48 h后，HeLa細胞上的TLR2表達增強;Western blotting檢測結果顯示:UU1非干預組細胞TLR2低表達，UU1干預組的TLR2表達水平較非干預組的增高，各UU1濃度組與對照組比較(P