膠原基質(zhì)的肝素化改性及其作為轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)控釋載體的研究.pdf

1、通過對膠原基質(zhì)的化學(xué)改性，改善膠原基質(zhì)的力學(xué)性能、控制降解速率和對生長因子的控制釋放行為，使其在結(jié)構(gòu)、組成和生物行為上盡可能的模擬細(xì)胞外基質(zhì)。經(jīng)過交聯(lián)改性和肝素化改性的膠原基質(zhì)經(jīng)過負(fù)載骨修復(fù)生長因子(TGF，transforminggrowthfactor)，期望成為軟骨修復(fù)組織工程材料，為將來的軟骨修復(fù)的臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ)。
　　方法:從牛筋中提取膠(Collagen)原并將其制成凝膠，加入不同量的殼聚糖(Chitosan)，在-

2、80℃下冷凍干燥，制備膠原基質(zhì)海綿。通過用EDC/NHS(1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimide/N-Hydroxysuccinimide)、GP(Genipin)交聯(lián)和EDC/NHS、GP與肝素(Hep，Heparin)同步法對膠原基質(zhì)進(jìn)行改性，并通過掃描電鏡、交聯(lián)度、吸水率、機械強度、體外降解、細(xì)胞毒性及增殖等技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)與性能表征。結(jié)果說明，未經(jīng)處理的對照組、EDC/NHS組、

3、GP組以及EDC/NHS-Hep組，GP-Hep組在理化性能上有明顯的差異。
　　使用甲苯胺藍(lán)來測膠原基質(zhì)復(fù)合的肝素量，發(fā)現(xiàn)肝素的復(fù)合量隨著膠原基質(zhì)中的殼聚糖的含量的增加而增加，當(dāng)殼聚糖含量為15％時肝素含量為28mg/g。通過2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS，2，4，6-Trinitrobenzenesulfonicacidsolution)法測定自由氨基數(shù)，發(fā)現(xiàn)EDC/NHS組、GP組、EDC/NHS-Hep組、GP-Hep

4、組的自由氨基數(shù)相比于對照組有明顯的下降。通過吸水試驗發(fā)現(xiàn)，在Col組中通過EDC/NHS、GP、EDC/NHS-Hep、GP-Hep改性，吸水率明顯的提高;而Col/Cht組經(jīng)EDC/NHS、EDC/NHS-Hep改性，吸水率下降;經(jīng)GP、GP-Hep改性吸水率有小幅提升。其中，EDC/NHS、GP組的吸水率，分別高于EDC/NHS-Hep、GP-Hep組。通過體外降解試驗發(fā)現(xiàn)酶解穩(wěn)定性得到改善，經(jīng)過25天的體外降解后，EDC/NHS、

5、EDC/NHS-Hep組的降解率在30％～40％之間，GP、GP-Hep組的降解率低于20％，而對照組在15天以內(nèi)幾乎完全降解。用MTT法檢測各組的細(xì)胞毒性，試驗表明各組幾乎都沒有細(xì)胞毒性。采用復(fù)乳法，用聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA，poly(lactic-co-glycolicacid))制備了TGF-PLGA載藥微球，藥物的包封率約在70％左右。用表面電位粒徑儀分析微球的粒徑，大部分的微球粒徑小于2μm，有60％左右的微球粒徑小