細(xì)胞自噬抑制劑3-MA預(yù)防肝纖維化的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的:通過應(yīng)用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)在肝纖維化動(dòng)物模型中調(diào)節(jié)自噬(autophagy)水平，觀察自噬水平的改變對(duì)肝纖維化的影響，并探討以自噬信號(hào)通路作為肝纖維化治療的新靶點(diǎn)的可行性及為肝纖維化的治療提供可能新的途徑。
　　方法:1.70只Balb/C小鼠隨機(jī)分為3組，模型組及3-MA組腹腔注射20％CCl4橄欖油溶液，劑量為2ml/kg，正常對(duì)照組腹腔注射等量的橄欖油2ml/kg，同時(shí)3-MA干

2、預(yù)組腹腔注射3-MA，劑量為15μg/g，共8w，每周2次;2.第八周時(shí)采取眼眶靜脈血檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)酶、總膽紅素;3.透射電子顯微鏡觀察雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體或自噬溶酶體;4.免疫組化檢測(cè):微管相關(guān)蛋白1輕鏈和a-平滑肌肌動(dòng)蛋白;5.肝臟標(biāo)本切片行HE和Masson染色，并在光學(xué)顯微鏡下觀察纖維化程度和膠原纖維分布。
　　結(jié)果:1.三組間ALT、AST、TBIL檢測(cè)結(jié)果組間比較，模型組最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

3、＜0.05);2.透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組線粒體無明顯空泡化，胞內(nèi)無自噬小體。模型組細(xì)胞內(nèi)可見明顯的線粒體空泡化，大量的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小體，3-MA干預(yù)組空泡化的線粒體和自噬小體數(shù)目均較少;3.模型組及3-MA干預(yù)組LC3-Ⅱ明顯高于空白對(duì)照組，且模型組較3-MA組高，三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);4.α-SMA的表達(dá)在模型組及3-MA組明顯高于空白對(duì)照組，且模型組較3-MA組高，三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05

4、);5.HE染色發(fā)現(xiàn)模型組肝纖維化程度較3-MA組重;6.Masson染色分析各組纖維組織平均光密度及總面積，發(fā)現(xiàn)三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，且模型組最高。
　　結(jié)論:1.在CCL4所誘導(dǎo)的肝纖維化模型中存在自噬現(xiàn)象，細(xì)胞自噬參與肝纖維化的形成。2.細(xì)胞自噬抑制劑3-MA對(duì)肝纖維化有顯著抑制肝纖維化進(jìn)展的作用。3.3-MA能通過降低自噬水平來進(jìn)而抑制肝星狀細(xì)胞活化達(dá)到抑制CCl4所誘導(dǎo)的肝纖維化進(jìn)展的目的，提示其在預(yù)