CYP11B2-B1基因多態(tài)性與醛固酮瘤臨床表型及預后的相關研究.pdf

1、原發(fā)性醛固酮增多癥（簡稱原醛，Primary Aldosteronism，PA）是最常見的內(nèi)分泌高血壓之一，兩種常見臨床亞型為醛固酮瘤（Aldosterone Producing Adenoma，APA）和特發(fā)性醛固酮增多癥（Idiopathic Hyperaldosteronism，IHA）。原醛主要的病理生理特點是過多醛固酮的自主分泌。APA 多采用手術治療；盡管大多數(shù)原醛患者術后血壓恢復正常，但仍有33～44%術后持續(xù)性高血壓。然

2、而，目前過多醛固酮分泌的機制和術后血壓恢復不均一的機制仍不清楚。影響高血壓醛固酮代謝和血壓調(diào)控的遺傳因素是否與APA 過多醛固酮分泌和術后持續(xù)高血壓相關還仍不清楚。
　　 CYP11B2基因編碼合成醛固酮的醛固酮合酶；CYP11B1基因則編碼合成皮質(zhì)醇的11-β羥化酶，兩基因位置相近，均位于染色體8q24。研究表明兩基因座位上的許多DNA 多態(tài)性位點處于完全連鎖不平衡狀態(tài)（Linkage Disequilibrium，LD），且

3、CYP11B2基因多態(tài)性位點（如rs1799998，intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型和rs4539）與原發(fā)性高血壓、11-β羥化酶活性降低、醛固酮分泌與代謝失調(diào)，心血管風險密切相關。上述研究提示CYP11B2/B1 多態(tài)性位點可能與原醛臨床表型及術后血壓相關。在此假設基礎上，本研究對6個DNA 多態(tài)性位點，包括CYP11B2基因的rs1799998 (C-344T)、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539 (A2718G)、rs64

4、14和CYP11B1基因的rs6387 (G225A)、rs6410 (A2803G)進行基因分型和單體型分析，以判斷它們對原醛中CYP11B2基因表達、臨床表型的影響，并探討它們在術后持續(xù)高血壓中的作用。
　　 方法：
　　 1. 采用Dneasy Blood & Tissue 試劑盒（Qiagen公司)提取93例隨訪到的APA 患者的組織DNA；在公共SNP數(shù)據(jù)庫(http://ncbi.nlm.nih.gov/SN

5、P/和http://www.hapmap.org/)中選擇CYP11B2和CYP11B1基因中頻數(shù)≥0.05，且文獻報道與醛固酮代謝和高血壓相關的位點，包括CYP11B2基因的4個多態(tài)性位點：rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539和rs6416 及 CYP11B1基因的2個多態(tài)性位點：rs6410和rs6387。采用一對獨立的PCR 擴增intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型位點，其余5個位點采用MGB-Taqman

6、探針法進行基因分型。采用Haploview 4.0 分析LD和Hardy-Weinberg 平衡。
　　 2. 采用SYBR Green熒光定量RT-PCR法檢測69例APA組織和20例正常腎上腺組織(取自手術的腎癌患者)中CYP11B2和CYP11B1基因的表達，2-C△△T法計算APA組織中基因表達量相對正常腎上腺組織的變化。放射性免疫法檢測血漿醛固酮的濃度（PAC）和血漿腎素活性（PRA），并用Pearson相關分析它們與

7、基因表達的關系。
　　 3.在 Rstatistics program 2.7.0程序包中使用SNPassoc 1.5-3和Haplo.stats 1.3.8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及單體型與CYP11B2基因表達量和血漿醛固酮濃度、收縮壓、舒張壓等臨床表型的關系。
　　 4. 在 R statistics program 2.7.0 程序包中使用SNPassoc 1.5-3和Haplo.stats 1.

8、3.8分析CYP11B2和CYP11B1基因型及單體型與原醛術后血壓恢復的相關性。
　　 結(jié)果：
　　 1.檢測了6個基因多態(tài)性位點，其中5個位點（包括CYP11B2基因的rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539和CYP11B1基因的rs6387、rs6410）在所有隨訪到的的APA 患者中均獲得成功檢測，等位基因頻數(shù)均>0.2，基因型頻數(shù)均>0.01。所有位點基因型分布均符合Hardy-Wein

9、berg 平衡 (對rs6387，rs6410，rs4539，intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型，rs1799998：P 分別為0.06，0.71，1.0，0.12，0.11)。配對的LD 分析表明rs6387與rs6410和rs1799998 存在著較強的LD(D ′ 0.95，0.73)，rs4593和 rs1799998及rs6410和intron 2 野生型/轉(zhuǎn)位型之間也有稍強的LD(D ′ 0.52)。
　　 2.在69例

10、APA和20例正常腎上腺組織中均檢測到CYP11B2 mRNA和CYP11B1mRNA的表達。相對正常腎上腺組織，APA組織中CYP11B2 mRNA表達明顯上調(diào)，為正常腎上腺組織的3.58 倍（p<0.01）。且APA組織中CYP11B2 mRNA表達與血漿醛固酮水平有明顯相關性（r=0.649，p<0.01），但與血漿腎素活性無關（r=-0.133，p=0.277）。APA組織CYP11B1 mRNA表達降低，是正常腎上腺組織的0.

11、54 倍，但兩者差異無統(tǒng)計學意義（p=0.089）。APA組織中CYP11B1 mRNA表達與血漿腎素活性無相關性（r=-0.165，p=0.185），與血漿醛固酮水平也無相關性（r=-0.08，p=0.946）。
　　 3.單個位點分析中，未發(fā)現(xiàn)CYP11B2和 CYP11B1基因的多態(tài)性位點包括rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539、rs410和rs6387與CYP11B2基因mRNA表達，血漿醛固

12、酮濃度，術前收縮壓、舒張壓相關（p 均>0.05）。單體型分析中，GlobalScore 統(tǒng)計顯示：CYP11B2-CYP11B1單體型與CYP11B2mRNA表達量增加相關（global-stat=16.18，df=8，p=0.04），與血漿醛固酮水平也相關（global-stat=20.41，df=8，p=0.009）；但與術前收縮壓和舒張壓不相關（分別p=0.34，p=0.54）。多元回歸分析發(fā)現(xiàn)單體型H1和H3與CYP11B2基

13、因mRNA的表達上調(diào)相關（經(jīng)過Bonferroni 校正后分別p=0.02；0.03），H6、H10和H16與過多的醛固酮分泌相關（經(jīng)過Bonferroni 校正后分別p=0.015；0.003；p=0.049）；但未見有單體型與術前收縮壓和舒張壓相關（p均>0.05）。
　　 4.單個位點分析：上述五個位點包括rs1799998、intron2 野生型/轉(zhuǎn)位型、rs4539、rs410和rs6387中只有rs4539 (AA)

14、與術后持續(xù)性高血壓相關（經(jīng)過Bonferroni 校正后p=0.01）。單體型分析中：Global Score 統(tǒng)計顯示CYP11B2-CYP11B1單體型與原醛術后血壓恢復相關（Max-Stat sim. P=0.006）；多元回歸分析中發(fā)現(xiàn)單體型H1和H3是預測術后持續(xù)性高血壓的遺傳性危險因子（經(jīng)過Bonferroni 校正后，分別p=0.02;0.03）。另外，傳統(tǒng)因素包括高血壓持續(xù)時間長，有高血壓家族史和術前較高的收縮壓是術后恢

15、復不好的傳統(tǒng)風險因素（經(jīng)過Bonferroni 校正后，分別p=0.002，=0.0015，<0.00005）。
　　 結(jié)論：
　　 1.對隨訪到的93位APA 患者獲得了較為完善的CYP11B2和 CYP11B1基因多態(tài)性的遺傳學資料，為后續(xù)證實CYP11B2/B1基因多態(tài)性和臨床表型關系的研究提供了基礎。
　　 2. APA患者血漿醛固酮的過多分泌可能與CYP11B2基因的表達上調(diào)有關，而后者可能與APA組織

16、中出現(xiàn)CYP11B1基因的表達相關。
　　 3. 盡管作用較弱，本研究顯示APA患者CYP11B2和 CYP11B1基因多態(tài)性可能通過上調(diào)CYP11B2的表達，導致血漿醛固酮水平的升高。
　　 4. 盡管作用較弱，本研究顯示APA 患者術后血壓可能受到CYP11B2/CYP11B1基因多態(tài)性的影響。提示遺傳因素在APA 患者術后血壓恢復不均一的機制中可能起一定的作用，單體型H1和H3可能成為預測術后持續(xù)性高血壓的遺傳指標