兩種肉雞胚胎期脂肪代謝及DHEA調(diào)控研究.pdf

1、本文以三黃肉雞和AA肉雞為實驗對象，研究AA肉雞和三黃肉雞胚胎期脂肪代謝及脂肪代謝關(guān)鍵基因在肝臟中表達(dá)水平的發(fā)育性變化，探討脂肪型肉雞和瘦肉型肉雞胚胎期脂肪代謝的異同；在此基礎(chǔ)上通過母體營養(yǎng)效應(yīng)及種雞飼養(yǎng)效應(yīng)對后代胚胎期三黃肉雞脂肪代謝進(jìn)行調(diào)控，探索母體效應(yīng)對后代胚胎期肉雞脂肪代謝及肝臟脂肪代謝關(guān)鍵因子表達(dá)水平的影響程度；孵化前向AA肉雞種蛋中導(dǎo)入DHEA，以探究其對胚胎期肉雞脂肪代謝的影響及調(diào)控機理，為調(diào)控肉雞脂肪代謝提供依據(jù)。

2、 1.胚胎期肉雞脂肪代謝及胚肝脂肪代謝關(guān)鍵因子的發(fā)育性變化及品種特點 選用生長速度快，腹部脂肪沉積多的Arbor Acres肉雞(簡稱AA肉雞)和生長速度慢，脂肪分布均勻的三黃肉雞(簡稱SH肉雞)為實驗動物。分別取9、14、19胚齡和出殼時的肝臟及14、19胚齡和出殼時的血液。試劑盒測定血清和肝臟中TG含量，血清TC含量；RIA法檢測血清和肝臟中激素含量；RT-PCR定量檢測胚胎期肉雞肝臟脂肪合成代謝關(guān)鍵因子ACC、EAS、M

3、E、SREBP-1c、ApoB及脂肪分解關(guān)鍵因子CPT-1、LPL和PPARa mRNA水平。結(jié)果顯示，胚重和肝重隨著胚胎發(fā)育，呈顯著增加；血清TG含量減少，TC增加，肝臟TG含量14胚齡時陡然上升；胚胎期胰島素和胰高血糖素共同調(diào)節(jié)脂類代謝，出殼后則以胰高血糖素調(diào)節(jié)為主；肝臟T<,3>水平隨雞胚發(fā)育呈上升趨勢，T<,4>呈下降趨勢。脂肪型肉雞胚重、肝重、肝臟脂肪含量均大于瘦肉型肉雞。胚胎期AA肉雞脂肪酸合成關(guān)鍵酶ACC和FAS基因表達(dá)水

4、平啟動早于三黃肉雞，AA肉雞表達(dá)水平最大峰值高于三黃肉雞；胚胎期兩種肉雞肝臟ACC基因在發(fā)育早期就啟動表達(dá)，而FAS基因在出殼前才表達(dá)，且ACCc基因表達(dá)水平最大時FAS最小，ACC基因表達(dá)水平最小時FAS最大。胚胎期肝臟ME和ApoB100基因表達(dá)水平兩種肉雞間無顯著差異。胚胎期肉雞肝臟SREBP-1c基因與FAS基因表達(dá)水平相關(guān)性較高，且在AA肉雞表現(xiàn)更為明顯。肝臟CPT-I和PPARa基因出殼時AA肉雞顯著高于三黃肉雞；LPL基因

5、出殼時肝臟不表達(dá)或表達(dá)很少。提示肉雞肝臟脂肪代謝關(guān)鍵酶基因表達(dá)水平在胚胎期呈發(fā)育時序性規(guī)律；腹部脂肪沉積較多的AA肉雞肝臟脂肪代謝關(guān)鍵基因的表達(dá)水平大于脂肪分布均勻的三黃肉雞，胚胎期肉雞脂肪代謝存在品種差異。 2.母體效應(yīng)對后代胚胎期脂肪代謝及肝臟脂肪代謝關(guān)鍵因子基因表達(dá)水平的影響 1) 母體營養(yǎng)對后代胚胎期脂肪代謝及肝臟脂肪代謝關(guān)鍵因子基因表達(dá)水平的影響 挑選40周齡體況良好的產(chǎn)蛋三黃肉種雞，隨機分為兩組，對照

6、組飼喂三黃肉種雞正常日糧，實驗組飼喂AA肉種雞日糧。對照組和實驗組日糧的差別在于蛋白質(zhì)含量從20％下調(diào)到18％，其它營養(yǎng)素保持一致。分別取9、14和19胚齡及剛出殼時的肝臟和14、19胚齡及剛出殼時的血樣。試劑盒測定血清和肝臟中TG含量，血清TC含量；RIA法檢測血清中激素含量；以sYBR為染料，β-actin為內(nèi)參，2<'-△△CT>方法熒光定量PCR檢測后代胚胎期肝臟脂肪合成關(guān)鍵因子ACC、FAS、ME、SREBP-1c、ApoB和

7、脂肪分解關(guān)鍵因子CPT-1和PPARa mRNA表達(dá)。結(jié)果表明，實驗組和對照組胚重、肝重?zé)o顯著差異；實驗組和對照組血清及肝臟生化參數(shù)無顯著差異；實驗組和對照組血清激素含量無顯著差異。實驗組和對照組后代胚胎期肝臟ACC、FAS、ME、SREBP-1c、ApoB基因表達(dá)水平無顯著差異；實驗組和對照組后代胚胎期肝臟CPT-1和PPARa基因表達(dá)水平無顯著差異。說明在不影響生產(chǎn)性能的前提下，微調(diào)肉種雞蛋白水平，以節(jié)約生產(chǎn)成本，對其后代生長發(fā)育及

8、脂肪代謝無顯著影響。 2)母體飼養(yǎng)方式對后代胚胎期脂肪代謝及肝臟脂肪代謝關(guān)鍵因子基因表達(dá)水平的影響 挑選40周齡體況良好的產(chǎn)蛋三黃肉種雞，隨機分為兩組，對照組籠養(yǎng)，實驗組平養(yǎng)，飼喂相同的肉種雞日糧。分別取9、14、19胚齡和出殼時的肝臟及14、19胚齡及出殼時的血樣。試劑盒測定血清和肝臟中TG含量，血清TC和NEFA含量；RIA法檢測血清中激素含量；以sYBR為染料，β-actin為內(nèi)參，2<'△△CT>方法熒光定量PC

9、R檢測后代胚胎期肝臟脂肪合成關(guān)鍵因子ACC、FAS、ME、SREBP-1c、ApoB和脂肪分解關(guān)鍵因子CPT-1和PPARa mRNA水平。結(jié)果表明，實驗組和對照組9、14和19胚齡時，胚重、肝重?zé)o顯著差異；出殼時，實驗組顯著小于對照組。實驗組和對照組血清和肝臟TG、血清TC、NEFA含量在9、14和19胚齡時無顯著差異；而出殼時，實驗組顯著小于對照組。實驗組和對照組血清胰島素、胰高血糖素在雞胚發(fā)育整個過程中均無顯著差異。實驗組和對照組

10、瘦素含量在9、14和19胚齡時無顯著差異；出殼時，實驗組顯著小于對照組。9和14胚齡時，實驗組和對照組后代胚胎期肝臟ACC、FAS、ME、SREBP-1c、ApoB、CPT-1和PPARa基因表達(dá)水平無顯著差異；19胚齡時，實驗組后代胚胎期肝臟ME基因表達(dá)水平顯著小于對照組，實驗組和對照組后代胚胎期肝臟ACC、FAIS、SREBP-1C、ApoB、CPT-1和PPARa基因表達(dá)水平則無顯著差異；出殼時，實驗組胚胎期肝臟FAS、SREBP

11、-1c、CPT-1基因表達(dá)水平顯著小于對照組，實驗組后代胚胎期肝臟ACC、PPARa和apoB基因表達(dá)水平與對照組無顯著差異。由此提示與籠養(yǎng)肉種雞相比，平養(yǎng)肉種雞降低其后代胚胎期脂肪代謝，降低其后代出殼時的脂肪沉積。說明可以通過改變?nèi)夥N雞飼養(yǎng)方式來調(diào)控其后代胚胎期脂肪代謝。 3.DHEA對胚胎期脂肪代謝調(diào)控機理研究 挑選無破殼、蛋重相近的AA肉雞種蛋，隨機分為兩組，對照組導(dǎo)入50μL溶劑(DMSO)，實驗組導(dǎo)入含50mg

12、/kg蛋重的DHEA，其溶解于50μL DMSO溶劑中。分別取9、14、19胚齡和剛出殼時的肝臟及14、19胚齡和出殼時的血樣。試劑盒測定血清和肝臟中TG含量，血清TC含量；RIA法檢測血清中激素含量；以SYBR為染料，β-actin為內(nèi)參，2<'-△△CT>方法熒光定量PCR檢測胚胎期肝臟ACC、FAS、ME、SREBP-1c、ApoB、CPT-1和PPARa基因表達(dá)水平。結(jié)果表明，實驗組胚重和肝重在整個發(fā)育過程中略小于對照組，但無顯

13、著差異。實驗組肝臟血清TG含量在14、19胚齡和出殼時顯著小于對照組。實驗組血清TG含量在14胚齡和出殼時顯著小于對照組。實驗組血清TC含量出殼時顯著大于對照組。出殼時，實驗組血清LPL活性顯著大于對照組。實驗組和對照組血清胰島素、瘦素和胰高血糖素在19胚齡和出殼時均無顯著差異。實驗組肝臟ACC基因表達(dá)水平在19胚齡時顯著大于對照組；實驗組肝臟ACC基因表達(dá)水平出殼時顯著小于對照組。在9、14和19胚齡時，實驗組和對照組肝臟FAS基因表

14、達(dá)水平基本保持一致，維持在較低水平；而出殼時，實驗組極顯著地小于對照組。實驗組肝臟ME基因表達(dá)水平14、19胚齡和出殼時顯著小于對照組。在9、14和19胚齡時，實驗組和對照組肝臟SREBP-1c基因表達(dá)水平保持一致，維持在較低水平；而出殼時，實驗組極顯著地小于對照組。實驗組ApoB基因表達(dá)水平在9、14胚齡和出殼時顯著小于對照組。實驗組肝臟CPT-1基因表達(dá)水平在14、19胚齡和出殼時顯著小于對照組。實驗組肝臟PPARa基因表達(dá)水平在1