動(dòng)物性食品中大環(huán)內(nèi)酯類和林可胺類多殘留定量與確證方法研究.pdf

1、大環(huán)內(nèi)酯類藥物是一類廣泛使用的藥物，可分為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和大環(huán)內(nèi)酯抗寄生蟲(chóng)(阿維菌素類)兩類。大環(huán)內(nèi)酯抗生素在獸醫(yī)上廣泛用于治療牛、羊、豬、禽的呼吸道疾病和腸道細(xì)菌感染，也用于飼料添加劑以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。大環(huán)內(nèi)酯抗寄生蟲(chóng)已經(jīng)在世界范圍內(nèi)用于保障人、動(dòng)物和植物的健康，它可以殺滅寄生蟲(chóng)，如蛔蟲(chóng)、肺蟲(chóng)和螨蟲(chóng)等。
　　 在獸醫(yī)治療上，抗生素聯(lián)合用藥非常普遍。聯(lián)合用藥可以帶來(lái)單獨(dú)使用所沒(méi)有的效果，林可霉素、壯觀霉素復(fù)方制劑(比率1∶2)就

2、是其中一例。壯觀霉素、林可霉素兩者聯(lián)合使用具協(xié)同作用，常用于治療生長(zhǎng)期家禽的慢性呼吸道疾病、支原體肺炎和腹瀉等。
　　 這些抗生素藥物的不正確使用會(huì)在可食性組織中殘留，對(duì)消費(fèi)者產(chǎn)生毒性反應(yīng)，如過(guò)敏人群會(huì)產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)，或誘導(dǎo)耐藥菌株產(chǎn)生而引起間接危害。阿維菌素類毒性低，但其在動(dòng)物體內(nèi)殘留時(shí)間長(zhǎng)，可能會(huì)對(duì)人體造成危害。關(guān)于這些藥物的多殘留方法，國(guó)內(nèi)外雖有報(bào)道，但目前還沒(méi)有不同種類藥物的多殘留方法，并且檢測(cè)種類也較少。因此本研究從建立

3、不同種類藥物的多殘留方法展開(kāi)研究，建立了大環(huán)內(nèi)酯類抗生素和大環(huán)內(nèi)酯抗寄生蟲(chóng)、林可胺和壯觀霉素兩個(gè)多殘留方法，以監(jiān)測(cè)這些藥物在動(dòng)物可食性組織的殘留。
　　 方法一是建立動(dòng)物可食性組織中大環(huán)內(nèi)酯類藥物的HPLC-MS/MS法。組織樣品用甲醇/乙腈(1∶1)混合溶液提取，正己烷脫脂，40℃水浴下緩慢蒸干提取液。殘余物甲醇溶解，40℃水浴下氮?dú)饩徛蹈桑鲃?dòng)相0.5mL溶解，12,000rpm離心后取10μL進(jìn)樣。檢測(cè)采用選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)(

4、SRM)模式。結(jié)果表明，大環(huán)內(nèi)酯類在組織中的檢出限(CCα;α1％)在0.3μg/kg～1.5μg/kg之間，定量限(CCβ；β5％)在0.5μg/kg～2.5μg/kg之間。在不同加標(biāo)水平下，平均回收率在64.3％～88.0％之間，日間變異系數(shù)在4.6％～24.3％之間。
　　 方法二是以固相萃取和衍生為基礎(chǔ)，建立同時(shí)檢測(cè)豬、牛、雞可食性組織以及雞蛋和牛奶中林可霉素、壯觀霉素的氣相色譜分析法和林可霉素、克林霉素和壯觀霉素的氣質(zhì)

5、確證方法。組織樣品用磷酸緩沖液/三氯乙酸混合液提取，加入離子對(duì)試劑，供SPE凈化，甲醇洗脫，洗脫液40℃水浴氮?dú)獯蹈?。殘余物加乙腈和BSTFA于75℃反應(yīng)60min，用氮?dú)饩徛蹈?，正己烷定容，離心，取1μL上清液用氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定。
　　 氣相色譜定量方法結(jié)果顯示，組織中林可霉素和壯觀霉素的最低檢測(cè)限分別是20μg/kg、30μg/kg，最低定量限分別是30μg/kg、40μg/kg。在四個(gè)加標(biāo)水平下，林可霉素

6、和壯觀霉素回收率介于70.6％～86.5％之間，日間變異系數(shù)≤12.6％。
　　 確證方法以選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)為測(cè)定方法。林可霉素和克林霉素均以離子126為定量離子，壯觀霉素以145為定量離子。該條件下，林可霉素的最低檢測(cè)限和最低定量限分別是3μg/kg和5μg/kg，克林霉素的最低檢測(cè)限和最低定量限分別是15μg/kg和20μg/kg，壯觀霉素的最低檢測(cè)限和最低定量限分別是15μg/kg和20μg/kg。平均回收率介于68