缺氧預(yù)處理對創(chuàng)傷性腦損傷大鼠腦組織HIF-1α、VEGF表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：在現(xiàn)代高原軍事戰(zhàn)爭中,會面臨急性高原缺氧反應(yīng)引起的大幅度非戰(zhàn)斗減員,加上缺血缺氧性顱腦損傷無疑是“雪上加霜”。如何防護(hù)高原低氧惡劣環(huán)境的影響,已經(jīng)成為高原軍事醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)內(nèi)容。顱腦損傷后的腦組織缺血缺氧是導(dǎo)致腦損害主要因素。缺氧預(yù)處理在短時間內(nèi)預(yù)先給予機(jī)體刺激性缺氧,對隨后嚴(yán)重的缺血、缺氧損傷產(chǎn)生顯著防御能力,是當(dāng)前抗缺氧/缺血的研究熱點(diǎn)。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)

2、是依附于氧濃度調(diào)節(jié)重要因子,對氧環(huán)境有較強(qiáng)敏感性。血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是HIF-1α下游編碼靶蛋白,可參與神經(jīng)血管重塑而達(dá)到神經(jīng)保護(hù)作用。本課題擬通過建立大鼠顱腦創(chuàng)傷模型,研究顱腦創(chuàng)傷后大鼠挫傷周圍腦組織HIF-1α、VEGF表達(dá)變化,并觀察缺氧預(yù)處理對二者影響。
　　目的：(1)通過建立大鼠顱腦創(chuàng)傷模型,探討大鼠顱腦創(chuàng)傷后挫傷周圍腦組織HIF-1α及V

3、EGF表達(dá)變化;(2)通過建立缺氧預(yù)處理模型,觀察缺氧預(yù)處理對大鼠顱腦創(chuàng)傷后挫傷周圍腦組織HIF-1α及VEGF表達(dá)的影響,為缺氧預(yù)處理在防御缺血缺氧對腦組織損傷提供理論依據(jù)。
　　方法(1)204只Sprague-Dawley雄性大鼠采用隨機(jī)數(shù)字法分成對照組(Con組n=12)、創(chuàng)傷組(TBI組n=96)、缺氧預(yù)處理組(HPC組n=96)。TBI組采用改良的Feeney自由落體打擊模型,以重量50g砝碼,離大鼠骨窗面25 cm高

4、處下落打擊,HPC組給予缺氧預(yù)處理(50.47kPa,3d,3h/d)后,同法致腦損傷。對照組則不給予顱腦打擊。于傷后1h、4h、8h、12h和1d、3d、7d、14d時間點(diǎn)斷頭取腦,通過RT-PCR、Western blotting及免疫組化染色方法檢測挫傷灶周圍腦組織HIF-1α、VEGF表達(dá)變化,并采用免疫熒光雙標(biāo)法檢測VEGF分布及共存情況,根據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：①大鼠顱腦創(chuàng)傷后挫傷周圍腦組織HIF-1α在傷

5、后4、8、12 h和1、3d均明顯上升(P<0.05),HIF-1α mRNA在12h達(dá)到高峰,蛋白于1d達(dá)到高峰;缺氧預(yù)處理組缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)表達(dá)在傷后1h逐漸上調(diào),4h~7d HIF-1αmRNA及蛋白顯著上調(diào)(P<0.05),直至傷后14d表達(dá)趨于正常(P>0.05)。②大鼠顱腦創(chuàng)傷后挫傷周圍腦組織血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)在傷后4h表達(dá)上調(diào),VEGF mRNA表達(dá)在傷后1d出現(xiàn)峰值,蛋白3d達(dá)高峰,直至傷

6、后7d(P<0.05);缺氧預(yù)處理組VEGF在傷后1h表達(dá)上調(diào),4h~7d VEGF mRNA及蛋白顯著上調(diào)(P<0.05),傷后14d表達(dá)趨于正常(P>0.05)。③免疫熒光雙標(biāo)法檢測缺氧預(yù)處理組傷后3d VEGF表達(dá)較創(chuàng)傷組明顯,其表達(dá)VEGF在神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞較明顯。
　　結(jié)論：①以重量50g砝碼,離大鼠骨窗面25cm高處下落打擊可制作穩(wěn)定的大鼠顱腦損傷模型,穩(wěn)定性較好。②大鼠顱腦創(chuàng)傷后挫傷周圍腦組織HIF