蘇云金芽孢桿菌LLP29菌株的分離及其對白紋伊蚊作用機(jī)理的研究.pdf

1、本研究首次從苔蘚和植物葉片上分離獲得了多株蘇云金芽孢桿菌(Bt)野生菌株，并從白玉蘭葉片上分離篩選得到對蚊蟲有高效殺滅活性的LLP29 Bt菌株。為了解該新菌株的生物學(xué)特性，對其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)、基因型、蛋白等內(nèi)容的研究。結(jié)果顯示，該新菌株對白紋伊蚊的LC<,50>為0．33 μg/mg。經(jīng)PCR鑒定，該菌株的主要?dú)⑽没驗(yàn)閏ytl基因，克隆和測序該新基因，國際命名委員會(huì)將其命名為cytlAa6基因。成功克隆表達(dá)該基因后將其蛋白純化，純化的

2、cytlAa6毒素蛋白對白紋伊蚊幼蟲及其細(xì)胞系C6/36細(xì)胞都有高效活性。 為了更好地利用該菌株及其毒性蛋白對白紋伊蚊進(jìn)行生物防治，以白紋伊蚊敏感品系昆蟲及C6/36細(xì)胞為試驗(yàn)研究對象，進(jìn)行了作用機(jī)理的初步研究。免疫熒光染色和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：CytlAa6毒素蛋白主要結(jié)合于C6/36細(xì)胞膜和白紋伊蚊幼蟲中腸上。據(jù)報(bào)道，Cytl在蚊蟲防治中能延緩高抗性的產(chǎn)生。然而本研究發(fā)現(xiàn)，用CytlAa6蛋白連續(xù)作用C6/36細(xì)胞10

3、代，抗性比達(dá)19.16。為了詮釋該新蛋白對C6/36細(xì)胞潛在的抗性機(jī)制，本研究進(jìn)行了CytlAa6蛋白對敏感與抗性細(xì)胞的受體結(jié)合試驗(yàn)。間接免疫熒光結(jié)果顯示，敏感細(xì)胞與FITC標(biāo)記的抗體結(jié)合量明顯大于抗性細(xì)胞。ELISA試驗(yàn)也得出類似結(jié)果：敏感細(xì)胞與CytlAa6毒素蛋白的結(jié)合力大于抗性細(xì)胞。由此可見，受體結(jié)合能力的下降是細(xì)胞產(chǎn)生抗性的根本原因。Western Blot免疫雜交結(jié)果表明，抗性細(xì)胞26 kD蛋白的缺失是導(dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生抗性的主要