海南五指山蘇云金芽孢桿菌的分離與對小菜蛾高毒力菌株的篩選.pdf

1、本研究系統(tǒng)的從海南島五指山熱帶雨林區(qū)采集到433份土樣，利用醋酸鈉選擇培養(yǎng)基的分離方法從中分離到1009株芽孢桿菌，其中產(chǎn)晶體的蘇云金芽孢桿菌（簡稱Bt，下同）野生菌株30株，伴孢晶體類型有菱型、球型、方型、不規(guī)則型，體現(xiàn)了土壤中Bt菌株資源的多樣性，出菌率為6．93％。SDS-PAGE電泳圖譜顯示，表達的殺蟲晶體蛋白有130，120，90，80，50，40KDa，顯示出殺蟲晶體蛋白的的多樣性。在對五指山熱帶雨林區(qū)Bt菌沿海拔分布規(guī)律分

2、析發(fā)現(xiàn)五指山熱帶雨林區(qū)海拔1000米到1500米的土壤中Bt菌株出菌率比較高，低海拔與高海拔的地方Bt菌的出菌率都不高。
　　 利用本實驗室設(shè)計的50對與中國農(nóng)科院設(shè)計的16對鑒定蘇云金芽孢桿菌殺蟲晶體蛋白基因的通用引物，通過PCR-RFLP的方法對分離到的蘇云金芽孢桿菌進行新的殺蟲晶體蛋白基因的探尋。實驗中對3個菌株篩選到的三個經(jīng)PCR-RFLP分析具有多態(tài)性的PCR產(chǎn)物進行測序分析，結(jié)果表面這三條序列不是殺蟲晶體蛋白基因的編

3、碼序列，由于非特異擴增，擴增到了蘇云金芽孢桿菌基因組的序列中的序列，不是我們希望獲取的殺蟲晶體蛋白基因。
　　 為了分離到有高毒力的菌株，以本實驗室分離到的52株Bt野生菌株（其中30株為本實驗分離，另外22株為實驗室其他同學分離的菌株）為供試菌株，鱗翅目昆蟲小菜蛾和鞘翅目昆蟲黃粉蟲為供試昆蟲，進行生物測定。生物測定結(jié)果表明這52株對鞘翅目昆蟲黃粉蟲沒有毒性，而對鱗翅目昆蟲篩選到了8株高毒力的菌株，48小時校正致死率達90％，7