香煙煙氣對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞免疫功能的影響研究.pdf

1、目的：
　　從體內(nèi)和體外兩個方面探討香煙煙氣對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞免疫功能的影響,為吸煙致肺天然免疫損傷機(jī)制研究提供有力的科學(xué)依據(jù)。
　　方法：
　　1.體外細(xì)胞實驗:分別通過CCK-8法,Annexin-V FITC/PI雙染法和CFSE熒光標(biāo)記法分析香煙煙氣提取物(CSE)對NR8383細(xì)胞的比活力、凋亡和分裂增殖的影響。收集經(jīng)不同濃度CSE處理24h的NR8383細(xì)胞,與FITC標(biāo)記的大腸桿菌共同孵育2h后,用流式細(xì)

2、胞儀檢測胞內(nèi)熒光強(qiáng)度,分析CSE對NR8383細(xì)胞吞噬功能的影響。經(jīng)不同濃度CSE處理后的NR8383細(xì)胞與熒光標(biāo)記A549細(xì)胞共培養(yǎng)24小時,通過流式細(xì)胞儀檢測NR8383細(xì)胞對A549細(xì)胞的生長抑制情況。用2,7-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)染色后,熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀檢測不同濃度CSE處理后的NR8383細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,用紫外可見分光光度計檢測胞內(nèi)谷胱甘肽(GSH)水平的變化。
　　2.體內(nèi)動物實驗

3、r>　　選用清潔級 wistar大鼠作為實驗對象,分別設(shè)對照組(C組)、低劑量組(L組)、中劑量組(M組)和高劑量組(H組),每組10只動物,染毒18天。觀察大鼠的體重變化,分析血常規(guī)和血生化指標(biāo)。通過肺灌洗收集大鼠肺泡巨噬細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀分析肺泡巨噬細(xì)胞凋亡、吞噬功能的變化以及具有吞噬功能陽性細(xì)胞所占比例。
　　結(jié)果：
　　1.體外細(xì)胞實驗結(jié)果
　　NR8383細(xì)胞的吞噬功能隨著CSE濃度的變化而先增強(qiáng)后降低。單

4、獨用CSE處理NR8383細(xì)胞,在100μg/mL濃度的CSE作用下,巨噬細(xì)胞的吞噬功能與對照組相比提高0.5倍,此時的細(xì)胞比活力最高。在CSE和LPS共同作用下,CSE的濃度為100μg/mL時,NR8383細(xì)胞的吞噬功能提高到正常水平的3倍。而當(dāng)CSE濃度達(dá)到200μg/mL時,NR8383細(xì)胞的吞噬功能降低,細(xì)胞凋亡率為54.1％。
　　NR8383細(xì)胞對A549細(xì)胞的抑制顯示,隨著CSE濃度的升高,抑制作用先增強(qiáng)而后減弱。

5、在50μg/mL的CSE作用下,NR8383細(xì)胞對A549細(xì)胞的抑制作用最大。
　　胞內(nèi) ROS水平隨著 CSE濃度的升高,ROS水平先升高后下降。在25μg/mL的CSE作用下,胞內(nèi)ROS水平降為對照組的74.32%,而在最高濃度作用下,胞內(nèi)ROS水平是對照組的2.23倍。細(xì)胞內(nèi)GSH水平隨著CSE濃度的變化逐漸升高,在100μg/mL濃度時達(dá)到最高水平22.6μmol/L,而后隨著CSE濃度的升高呈下降趨勢。
　　2.體

6、內(nèi)動物實驗結(jié)果
　　經(jīng)香煙煙氣染毒后,大鼠體重與正常對照組相比呈劑量依賴性下降。大鼠肺泡巨噬細(xì)胞的凋亡率與染毒劑量呈正相關(guān)(r=0.998)。在較低的煙氣作用下,大鼠肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬功能與對照組相比有所提高,但中高劑量下,與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)香煙煙氣刺激后,肺泡巨噬細(xì)胞中的具有吞噬功能的陽性細(xì)胞所占比例與正常對照組相比明顯升高。血常規(guī)檢驗和血生化部分指標(biāo)與對照組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1、C