內(nèi)毒素和地塞米松對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的: 觀察內(nèi)毒素(LPS)和地塞米松(DEX)對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，探討肺泡巨噬細(xì)胞與炎癥的關(guān)系。
　　 方法: 用支氣管肺泡灌洗法分離培養(yǎng)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞，設(shè)正常對(duì)照組(PBS組)、LPS組、DEX組，采用瑞氏-姬姆薩染色觀察巨噬細(xì)胞形態(tài)，MTT法測(cè)巨噬細(xì)胞活力、透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)細(xì)胞凋亡率、Hoechst染細(xì)胞核形態(tài)等技術(shù)檢測(cè)LPS和DEX對(duì)大鼠肺泡巨噬細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。并應(yīng)用ELIS

2、A法分別測(cè)定各組培養(yǎng)的肺泡巨噬細(xì)胞24小時(shí)后上清液中TNF-α和IL-10的含量。
　　 結(jié)果:
　　 (1) 瑞氏-姬姆薩染色LPS組肺泡巨噬細(xì)胞體積大，漿豐富，胞核大，貼壁能力強(qiáng)，折光度好；DEX組肺泡巨噬細(xì)胞體積小，呈濃縮狀，胞漿少，胞核小，貼壁能力弱，易懸?。籔BS組肺泡巨噬細(xì)胞呈混合樣形態(tài)，可見圓形和成纖維狀細(xì)胞。
　　 (2) MTT 法檢測(cè)結(jié)果示LPS組6h后巨噬細(xì)胞明顯活力增強(qiáng)(P＜0.01)；D

3、EX組巨噬細(xì)胞活力在24小時(shí)明顯下降(P＜0.05)。
　　 (3) 透射電鏡觀察到LPS組和PBS組，細(xì)胞核膜完整，染色質(zhì)均勻，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好；DEX組可見形成凋亡小體，還可見凋亡細(xì)胞核固縮，細(xì)胞染色質(zhì)邊聚明顯，核膜表面凹凸不平，較明顯的核膜斷裂，胞質(zhì)濃縮減少更為明顯并可見大量電子密度高的核碎片、空泡、線粒體變圓、空泡化。
　　 (4) 流式細(xì)胞術(shù)作周期分析計(jì)數(shù)凋亡區(qū)(亞二倍體區(qū))細(xì)胞數(shù)量得出凋亡率，LPS組隨處理時(shí)間

4、延長(zhǎng)凋亡率減小，DEX組隨處理時(shí)間延長(zhǎng)凋亡率升高。
　　 (5) Hoechst染色：LPS組和PBS組細(xì)胞核呈彌散均勻的藍(lán)色熒光；DEX組染色呈陽(yáng)性，可見核縮小變形，濃染致密的顆粒塊狀熒光。(6) DEX組24h上清液IL-10的含量顯著升高(P＜0.01)，LPS組IL-10的含量顯著降低(P＜0.01)；LPS組在24h上清液中TNF-α含量明顯增加(P＜0.05)，DEX組上清液中TNF-α含量明顯降低(P＜0.05)。