奶山羊乳腺上皮細胞系的建立.pdf

1、應用動物乳腺生物反應器生產(chǎn)藥用蛋白是生物高新技術(shù)研究領(lǐng)域的熱點。乳腺生物反應器研究從模式動物——小鼠的轉(zhuǎn)基因開始，逐步建立起了大動物乳腺生物反應器制備的技術(shù)平臺。以牛羊等反芻動物制備乳腺生物反應器的前景十分誘人。奶牛產(chǎn)奶量高，一旦得到高表達的個體，其產(chǎn)量和效益十分可觀。但奶牛作為單胎動物，生產(chǎn)周期長、成本高。目前利用轉(zhuǎn)基因羊制備乳腺生物反應器有一些成功的例子。奶山羊泌乳期長，單位產(chǎn)奶量高，相對成本低，在乳腺生物反應器的制備方面極具應用價

2、值，以此為基礎(chǔ)將推動奶牛泌乳與乳腺生物反應器研究的不斷深入。 體外培養(yǎng)的奶山羊乳腺上皮細胞在乳腺生長發(fā)育和泌乳機制的研究及乳腺生物反應器的應用等方面具有重要作用。目前建立的一些奶山羊乳腺上皮細胞系往往喪失了泌乳功能，不適合作為研究泌乳機制及檢測乳腺表達載體的細胞模型。因此有必要對奶山羊乳腺上皮細胞的體外培養(yǎng)、激素與乳腺上皮細胞分泌功能的關(guān)系等方面進行深入研究，以探索建立奶山羊乳腺生物反應器細胞模型的有效方法。 本研究選用

3、泌乳性能好的關(guān)中奶山羊作為實驗材料。利用酶消化法獲得了奶山羊乳腺上皮細胞，對純化的乳腺上皮細胞進行了鑒定。通過細胞培養(yǎng)體系的確立及生物學形狀的檢測建立并鑒定了奶山羊乳腺上皮細胞系。此外，SDS-PAGE、甘油三酯生化測定及HPLC法對乳蛋白、乳脂和乳糖的測定反映了激素對乳腺上皮細胞泌乳功能的影響。從而為奶山羊乳腺生物反應器細胞模型的建立及奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳機制的研究提供實驗依據(jù)。 實驗結(jié)果表明，本研究獲得了純化的奶山羊乳腺上皮