山羊乳腺上皮細胞系的建立與培養(yǎng).pdf

1、本實驗采用組織塊和酶消化法分離山羊乳腺上皮細胞，對純化的細胞進行單細胞克隆并鑒定，采用二次回歸正交旋轉組合試驗設計，MTT顯色法定量探索山羊乳腺上皮細胞培養(yǎng)的最適條件，酶聯(lián)免疫吸附實驗與聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定乳腺上皮細胞是否具有正常的生理功能，最終成功建立了山羊乳腺上皮細胞系。 試驗一使用組織塊和酶消化法分離山羊乳腺細胞，結果表明組織塊培養(yǎng)可以分離純化出增殖能力較強的上皮細胞，Ⅰ型膠原酶和透明質酸酶聯(lián)合使用可獲得較純的上皮細胞，

2、貼壁后增殖能力較強，但多次傳代后細胞增殖能力有所下降。刮除法、相差消化法以及相差貼壁法三種方法聯(lián)合使用，經(jīng)過2-3次傳代可以得到細胞形態(tài)均一的乳腺上皮細胞。 試驗二本實驗進行乳腺上皮細胞單細胞克隆，發(fā)現(xiàn)口吸管法、克隆環(huán)法和細胞稀釋法細胞克隆率分別為O、5.9％和3.5％，一共得到3株細胞克隆，形態(tài)學觀察與細胞角蛋白18鑒定為乳腺腺泡上皮細胞?？寺…h(huán)法細胞克隆率最高，但是操作很難熟練進行，易導致克隆細胞的不純。細胞稀釋法操作簡單易

3、行，對細胞傷害小，克隆率較高。 試驗三采用五因素五水平的二次回歸正交旋轉組合試驗設計，MTT顯色法定量研究不同濃度的胎牛血清(FBS)、氫化可的松、胰島素、轉鐵蛋白、表皮生長因子(EGF)對山羊乳腺上皮細胞生長的影響，研究發(fā)現(xiàn)山羊乳腺上皮細胞培養(yǎng)的最適條件為12％胎牛血清、4μg/ml氫化可的松、10μg/ml胰島素、8μg/ml轉鐵蛋白及6ng/ml表皮生長因子的DMEM/F12。 試驗四使用催乳素誘導種在鋪有膠原的培