新生山羊小腸上皮細(xì)胞系的建立.pdf

1、動物細(xì)胞和組織培養(yǎng)已經(jīng)被廣泛的運(yùn)用于細(xì)胞和分子生物學(xué)領(lǐng)域，其中更多的應(yīng)用于細(xì)胞分化機(jī)制的研究。小腸是食物進(jìn)行消化吸收的主要場所，而小腸黏膜上皮細(xì)胞(Intestinal epithelial cells，IEC)是腸道主要的功能細(xì)胞，參與腸道食糜的消化、吸收、免疫屏障和應(yīng)激反應(yīng)等，并與腸道的內(nèi)、外分泌功能有密切關(guān)系。因此，進(jìn)行小腸上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)是研究小腸功能、病理、分化，營養(yǎng)物質(zhì)吸收機(jī)制及其調(diào)控的主要手段之一。 本試驗使用了

2、組織塊和酶消化等多種方法分離新生山羊小腸上皮細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)組織塊培養(yǎng)可以分離純化出增殖能力較強(qiáng)的小腸上皮細(xì)胞，通過刮除等方法純化獲得純的上皮細(xì)胞系，并穩(wěn)定傳代至12代。300U/ml膠原酶Ⅺ和0.1mg/ml中性蛋白酶I聯(lián)合使用可獲得完整的絨毛隱窩單位，其中的上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，24h內(nèi)貼壁，增殖能力較強(qiáng)，48h內(nèi)形成明顯的集落。但傳代后細(xì)胞難貼壁，增殖能力明顯下降。0.25％胰蛋白酶和膠原酶I消化獲得的細(xì)胞大多為成纖維細(xì)胞，大部分細(xì)胞無

3、法貼壁。50μg/ml嗜熱菌蛋白酶消化所得的消化液二次貼壁后，可獲得增殖能力較強(qiáng)的上皮細(xì)胞，但是傳代后細(xì)胞難以貼壁，增殖能力明顯減弱。 本試驗采用MTT顯色法定量研究了不同濃度的FBS(0％～10％)、Gln(0～8mmol/mL)、EGF(0～20 ng/mL)和胰島素(0～20μg/mL)對新生山羊IEC生長的影響，研究發(fā)現(xiàn)其他營養(yǎng)條件一致，F(xiàn)BS為10％，Gln濃度為2 mmol/mL，EGF濃度為10 ng/mL，胰島素