濰坊地區(qū)犬細(xì)小病毒的分離鑒定及其卵黃抗體的制備.pdf

1、本試驗(yàn)依托山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院教學(xué)動(dòng)物醫(yī)院進(jìn)行調(diào)查，在濰坊地區(qū)犬的各種傳染病中，犬細(xì)小病毒性腸炎發(fā)病率為43％，死亡率為13%，為臨床常見與多發(fā)病，是犬的主要傳染病之一。目前還沒有有效的治療藥物能根治該病，研究開發(fā) CPV抗體及其診斷、治療試劑將有助于防治該病。
　　本研究從臨床疑似犬細(xì)小病毒感染病死犬的腸道分泌物中分離 CPV，以貓腎細(xì)胞（F81）傳代，細(xì)胞增毒，進(jìn)而用傳統(tǒng)血凝實(shí)驗(yàn)、免疫電鏡和PCR法對分離病毒予以確認(rèn)。繼而以純

2、化的CPV作為抗原免疫健康產(chǎn)蛋雞，收集雞蛋，用改良PEG6000法和水稀釋法提取卵黃抗體(IgY)。用間接ELISA以及體外中和病毒法測定IgY效價(jià)。
　　結(jié)果：成功分離到犬細(xì)小病毒，凝集豬紅細(xì)胞的效價(jià)可以達(dá)到211，犬細(xì)小病毒陽性血清能夠把其抑制；根據(jù)犬細(xì)小病毒的基因組設(shè)計(jì)特異引物進(jìn)行 PCR擴(kuò)增，測序鑒定為CPV。暫命名為CPV濰坊分離株（WF株）。改良PEG6000法提取IgY的蛋白濃度高，間接酶聯(lián)免疫吸附法測定IgY的效價(jià)