50Hz工頻磁場暴露對FL細(xì)胞神經(jīng)酰胺代謝及相關(guān)信號通路的影響.pdf

1、目的:研究50 Hz、0.4 mT工頻磁場暴露對人羊膜細(xì)胞（FL細(xì)胞）神經(jīng)酰胺代謝及相關(guān)信號通路的影響。
　　方法:FL細(xì)胞接種于60 mm培養(yǎng)皿，培養(yǎng)24 h，經(jīng)50 Hz、0.4 mT磁場持續(xù)暴露60 min后提取細(xì)胞脂類，運用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)檢測分析細(xì)胞內(nèi)鞘磷脂(SM)、二氫鞘氨醇、鞘氨醇和鞘氨醇1-磷酸(S1P)的含量;使用酸性鞘磷脂酶（A-SMase）抑制劑丙咪嗪（imipramine）預(yù)處

2、理細(xì)胞，再檢測分析工頻磁場暴露后細(xì)胞內(nèi)SM的含量;利用Cathepsin D活性檢測試劑盒分析工頻磁場暴露后FL細(xì)胞內(nèi)Cathepsin D的活性;采用western blot技術(shù)分析工頻磁場暴露60min后細(xì)胞內(nèi)PP2AcY307位點的磷酸化水平;采用western blot技術(shù)分析工頻磁場暴露60 min后細(xì)胞內(nèi)ERK1/2的磷酸化水平，再用鞘氨醇激酶（SphK）抑制劑SKⅠⅡ預(yù)處理細(xì)胞，分析工頻磁場暴露后細(xì)胞內(nèi)S1P與ERK1/2

3、磷酸化之間的關(guān)系;采用CCK-8試劑盒檢測工頻磁場暴露60 min，再分別經(jīng)0h，3h，6h，12h，24 h，36 h培養(yǎng)后細(xì)胞的增殖情況;使用ERK激酶(MEK1/2)抑制劑U0126預(yù)處理細(xì)胞，再分析工頻磁場暴露對FL細(xì)胞增殖的影響，探究工頻磁場暴露條件下ERK1/2磷酸化與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系;最后使用SphK抑制劑SKⅠⅡ預(yù)處理細(xì)胞，驗證工頻磁場暴露條件下S1P與細(xì)胞增殖之間的關(guān)系;
　　結(jié)果:研究結(jié)果表明，暴露于50 H

4、z、0.4 mT磁場60 min后，F(xiàn)L細(xì)胞內(nèi)SM含量下降，與假輻照組相比，C24-SM組、C24:1-SM組和C16-SM組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;而丙咪嗪預(yù)處理能夠有效抑制工頻磁場暴露誘導(dǎo)的SM含量的下降。工頻磁場暴露可誘導(dǎo)FL細(xì)胞內(nèi)二氫鞘氨醇含量的增加(P＜0.05)。然而，工頻磁場暴露不影響FL細(xì)胞內(nèi)CathepsinD的活性和PP2Ac307位點的磷酸化水平（活化）。工頻磁場暴露60 min后，F(xiàn)L細(xì)胞內(nèi)ERK1/

5、2磷酸化水平增高，與假輻照組相比，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);而SKⅠⅡ預(yù)處理細(xì)胞能夠有效抑制工頻磁場暴露誘導(dǎo)的胞內(nèi)ERK1/2磷酸化(P＜0.05)。FL細(xì)胞經(jīng)工頻磁場暴露60 min并經(jīng)不同時間(0h，3h，6h，12h，24 h，36h)培養(yǎng)后，細(xì)胞增殖活動增強(qiáng)，與假輻照組相比，24 h培養(yǎng)組（P＜0.01）和36h培養(yǎng)組(P＜0.05)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，而且MEK1/2抑制劑U0126和SphK抑制劑SKⅠⅡ分別預(yù)處