白血病耐藥細(xì)胞中葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶經(jīng)ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對P-gp表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶（glucosylceramidesynthase，GCS）在白血病細(xì)胞的耐藥形成過程中是否經(jīng)過細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignal-regulatedkinase，ERK)通路來影響P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)的表達(dá)。
　　 方法：應(yīng)用RNA干擾技術(shù)和實時熒光定量PCR技術(shù)，觀察針對GCS的siRNA(GCSsiRNA)及ERK特異性化學(xué)抑制劑U012

2、6分別作用于白血病耐藥細(xì)胞株K562/A02細(xì)胞后，在不同的情況下MDR1mRNA的表達(dá)情況;同時應(yīng)用Westernblot印跡分析方法檢測經(jīng)轉(zhuǎn)染GCSsiRNA后細(xì)胞中ERK1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2)蛋白的磷酸化及非磷酸化的表達(dá)，及各組中P-gp的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：與空白對照組比較，當(dāng)ERK抑制劑U0126的濃度為10μmol/L時，對磷酸化ERK1/2(pho

3、sphorylated-ERK1/2,P-ERK1/2)沒有明顯抑制，P-gp表達(dá)亦沒有明顯差別;而隨著U0126濃度的逐漸升高，即20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L時對P-ERK1/2的抑制則呈濃度依賴性增強(qiáng)，同時P-gp的表達(dá)水平亦被明顯下調(diào)。RNA干擾實驗顯示:GCSsiRNA實驗組的GCSmRNA表達(dá)被明顯抑制，抑制率為70.50％(58.00％～76.00％);與陰性干擾對照組比較，GCSsiRNA實驗組在s