DAPT抑制Notch信號(hào)通路對(duì)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的: 1、以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y為研究對(duì)象，利用γ-分泌酶抑制劑DAPT抑制細(xì)胞Notch信號(hào)通路，觀察其對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響。 2、研究γ-分泌酶抑制劑DAPT對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞Notch信號(hào)通路節(jié)點(diǎn)分子Notchl和Hesl表達(dá)的影響 3、探究在SH-SY5Y細(xì)胞中Notch信號(hào)通路與核因子NF-kB信號(hào)通路存在的相互聯(lián)系及其可能機(jī)制。 方法: 以不同濃度DAPT對(duì)

2、SH-SY5Y細(xì)胞處理后，MTT增殖實(shí)驗(yàn)比較各處理組細(xì)胞增殖情況，得出最佳藥物作用濃度及最佳作用時(shí)間；以此藥物濃度和作用時(shí)間處理細(xì)胞，并以RT-PCR、Western blotting技術(shù)檢測與細(xì)胞增殖相關(guān)的部分基因表達(dá)變化情況。 結(jié)果: 1、DAPT可抑制SH-SY5Y細(xì)胞的增殖，且作用具有濃度和時(shí)間依賴性。 2、5μM DAPT可有效阻斷SH-SY5Y細(xì)胞Notch信號(hào)通路，藥物處理48小時(shí)后，NICD，He

3、sl表達(dá)減少，且NF-kB組分之一p65及其下游與細(xì)胞增殖有關(guān)靶基因Cyclin D1，Bcl-2表達(dá)亦有明顯的減少。 結(jié)論: 1、DAPT可有效阻斷Notch信號(hào)通路的傳導(dǎo)，抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SH-SY5Y細(xì)胞的增殖。 2、在SH-SY5Y細(xì)胞，Notch信號(hào)被阻斷后，可引起NF-kB家族最常見成員之一p65表達(dá)減少，且使其下游靶基因Cyclin D1、Bcl-2表達(dá)減少，表明Notch信號(hào)通路與核因子N