α3神經型尼古丁受體水平的變化對SH-SY5Y細胞APP代謝相關酶表達及Notch信號通路的影響.pdf

1、【目的】研究α3神經型尼古丁受體(nAChR)基因表達水平變化后與α-淀粉樣蛋白前體蛋白(?-Amyloid protein precursor，APP)代謝相關的α-分泌酶、γ-分泌酶和Notch通路的相關信號分子水平的變化，探討α3 nAChR神經保護作用機制及在阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)的發(fā)病機制中的作用。
　　【方法】α3 nAChR基因沉默 SH-SY5Y細胞株由課題組保存；用50μmol/

2、L的尼古丁(Nicotine)處理 SH-SY5Y上調細胞α3 nAChR基因表達；用Real-time PCR法和蛋白免疫印跡(Western Blotting)法分別測定細胞中α-分泌酶相關基因：金屬蛋白酶(A Disinterring and metalloproteinase，ADAM10)，γ-分泌酶相關基因：早老素(Presenilin，PS)和單過性跨膜蛋白(Nicastrin，NCT)以及 Notch信號通路信號分子 N

3、otch1和Hes1在 mRNA和蛋白表達水平的變化；并用終濃度為1μmol/L的β-淀粉樣蛋白(Aβ1-42)處理培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞和α3 nAChR基因沉默細胞48 h，用 Real-time PCR法和蛋白免疫印跡(Western Blotting)法分別測定細胞中 Notch信號通路信號分子 Notch1和Hes1在 mRNA和蛋白表達水平的變化。
　　【結果】穩(wěn)定轉染的細胞株的α3 nAChR的表達在 mRNA和蛋

4、白水平分別降低了91％和87%；而用50μmol/L Nicotine處理 SH-SY5Y細胞α3 nAChR的表達在 mRNA和蛋白質的表達水平分別升高了393%和201%；α3 nAChR基因沉默組的細胞中 ADAM10在 mRNA和蛋白的表達水平分別降低了95%和82%，PS mRNA和蛋白的表達水平分別降低了121%和82%，NCT mRNA和蛋白的表達水平分別降低了111%和92%；在α3 nAChR水平增加的SH-SY5Y細

5、胞中，ADAM10在 mRNA和蛋白的表達分別升高了201%和400%；PS mRNA和蛋白的表達水平分別升高了42%和45%，NCT mRNA和蛋白的表達水平分別升高了26%和800%。α3 nAChR沉默組細胞中 Notch信號通路節(jié)點分子 Notch1在 mRNA和蛋白的表達水平分別降低了35%和93%，Hes1在 mRNA和蛋白的表達水平分別降低了23%和85%；
　　在α3 nAChR水平增加組的細胞中 Notch1在

6、mRNA和蛋白的表達水平分別升高了32%和95%，Hes1在 mRNA和蛋白的表達水平分別升高了22%和105%。用終濃度為1μmol/L的Aβ1-42處理培養(yǎng)的SH-SY5Y細胞和α3 nAChR沉默組細胞后，在處理過的SH-SY5Y細胞 Notch1及 Hes1水平均明顯升高，α3 nAChR沉默組細胞經 Aβ1-42處理后，Notch1及 Hes1水平的升高更加明顯。
　　【結論】α3 nAChR可能通過改變 APP代謝途徑