閩產(chǎn)柘榮太子參多糖抗糖尿病藥效篩選及結(jié)構(gòu)表征.pdf

1、太子參為常用中藥，系石竹科太子參屬多年生草本宿根性植物異葉假繁縷Psudostellariaheterophylla(Miq.)PaxexPaxetHoffm的塊根。2010版《中國藥典》記載，具有益氣健脾，生津潤肺之功效。太子參臨床上被廣泛應(yīng)用到各類降糖的中藥處方中;現(xiàn)代藥理研究表明太子參總多糖能降低血糖，改善胰島素抵抗、改善糖耐量，提高機體免疫等作用。目前國內(nèi)外對太子參多糖的降血糖研究側(cè)重于粗多糖，對其分級純化，表征均一多糖組分的結(jié)

2、構(gòu)尚未報道;而不同分子量范圍多糖結(jié)構(gòu)存在差異，其降糖活性也不盡相同。
　　本課題采用乙醇對太子參粗多糖分級醇沉，基于1型和2型糖尿病動物模型，以空腹血糖等為考察指標篩選抗糖尿病多糖的最佳有效級分，并對其一級結(jié)構(gòu)進行深入研究，為降糖藥物的開發(fā)提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。本論文共分為四章，各章的主要內(nèi)容如下:
　　第一章，太子參多糖制備與分級與分子量測定
　　采用水提醇沉法提取太子參粗多糖(PH-TP)，Sevage法去除蛋白

3、質(zhì)，得率為7.2％;不同濃度乙醇分級醇沉獲得3個級分，命名為PF40、PF60、PF90多糖，得率分別是1.41％、2.89％、1.60％;采用苯酚-硫酸法及考馬斯亮蘭法測得PH-TP、PF40、PF60、PF90總多糖含量為41.08％～47.28％，總蛋白含量為0.17％～0.25％。
　　采用凝膠色譜法，以不同分子量葡聚糖為標準品，0.5mol/LNaCl溶液洗脫，初步測得PH-TP、PF40、PF60、PF90分子量范圍分

4、別為3.0×103～2.1×105Da、5.2×104～2.1×105Da、1.0×104～2.1×105Da、3.0×103～7.0×103Da。
　　第二章，太子參抗糖尿病活性多糖篩選
　　采用一次性尾靜脈注射四氧嘧啶的方法制備1型糖尿病小鼠模型，以鹽酸二甲雙胍為陽性對照;整個實驗周期，模型組小鼠保持高血糖穩(wěn)定，無自我修復(fù)。PH-TP、PF40、PF60、PF90多糖按高、中、低劑量組(4，2，1g/kg)灌胃給藥15d

5、和給藥30d，測定空腹血糖值。給藥15d，與模型對照組相比，PF40、PF60、PF90組小鼠空腹血糖值下降19.16％～25.81％，PH-TP組降糖藥效不明顯，陽性對照組血糖平均值下降60.11％。增加給藥時間，30d測定各組空腹血糖，與模型組相比，陽性對照組血糖平均值下降75.58％;PH-TP、PF40、PF60、PF90組隨著給藥時間的延長，血糖降低趨勢并沒有增大;太子參各級多糖對1型糖尿病小鼠只有微弱降糖作用。
　　采

6、用喂養(yǎng)高糖高脂飼料加腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)的方法制備2型糖尿病大鼠模型，以鹽酸二甲雙胍為陽性對照;整個實驗周期，模型組大鼠保持高血糖穩(wěn)定，無自我修復(fù)。PH-TP、PF40、PF60、PF90按高、中、低劑量(3.0，1.5，0.5g/kg)給藥15d和30d。給藥15d，與模型組相比，略微顯示出降糖效果;給藥30d，與模型組相比，PH-TP、PF40、PF60、PF90組其降糖效果顯著;PF40(分子量5.2×104～2.1×10

7、5Da)降糖效果尤為顯著，3.0g/kg高劑量組與陽性對照相當，其血糖平均值下降72.99％。
　　PF40級分多糖能改善2型糖尿病大鼠的糖耐量和胰島素耐量，能降低血清胰島素，改善胰島素抵抗。測定2型糖尿病大鼠血清相關(guān)標志物（CRP-C反應(yīng)蛋白、ACRP-30-脂連蛋白-30、IL10-白介素-10、Leptin-瘦素、IL1β-白介素-1β、TNFα-腫瘤壞死因子、1L2-白介素-2），結(jié)果表明PF40級分多糖可以提升抗炎因子I

8、L-10水平，降低炎癥因子TNF-α水平，提升ACRP-30，促進脂肪代謝，但是對CRP、Leptin、IL-1β、IL2水平?jīng)]有明顯影響。同時，該組分亦略有升高高密度脂蛋白(HDL)作用。
　　第三章，PF40太子參多糖分離純化及結(jié)構(gòu)表征
　　DEAE-纖維素和不同排阻范圍的Sephacryl、Sephadex凝膠聯(lián)用，獲得7個均一多糖組分;應(yīng)用高效凝膠色譜、PMP柱前衍生化高效液相色譜、GC-MS、NMR、元素分析、旋光

9、測定、IR等技術(shù)方法表征了H-1-2、N-3均一多糖組分的一級結(jié)構(gòu)。H-1-2均一多糖結(jié)構(gòu)類型為α-葡萄糖聚糖，是由α-1，4-連接葡萄糖構(gòu)成主鏈，α-1，4，6-連接葡萄糖形成分支，支鏈上含有少量α-1，6-連接葡萄糖;N-1均一多糖主要由1，4-連接半乳糖醛酸構(gòu)成主鏈，支鏈可能是由RGⅠ型多糖構(gòu)成，同時還雜和少量α-葡萄糖聚糖。
　　第四章，全文總結(jié)與展望
　　本課題研究發(fā)現(xiàn)分子量50kDa～210kDa太子參多糖降低2

10、型糖尿病大鼠空腹血糖效果尤為顯著，能有效降低血清胰島素，改善胰島素抵抗，同時還可以升高抗炎因子IL-10的水平，降低促炎因子TNF-α，提升ACRP-30因子水平，甚至能提升HDL水平的作用;該級分主要由α-葡聚糖和果膠2類多糖構(gòu)成。
　　糖尿病是一種慢性病，病程長且復(fù)雜，基本上不能根治，患者往往需要長期甚至是終生用藥，化學(xué)藥其副作用對人體的損害因累積而難以克服;多糖是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)之一，近年眾多文獻報道多糖具有降低血糖，