犬附紅細胞體病形態(tài)學(xué)研究及PCR快速診斷方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、本研究包括兩個試驗:試驗一,犬附紅細胞體病形態(tài)學(xué)診斷方法的研究；試驗二,犬附紅細胞體病PCR診斷方法建立與應(yīng)用。 實驗一、犬附紅細胞體形態(tài)學(xué)研究及血液學(xué)指標測定 無菌采集附紅細胞體感染犬的新鮮血液,用檸檬酸鈉抗凝,直接涂片鏡檢、姬姆薩染色、瑞士染色、吖啶橙染色鏡檢,觀察紅細胞及附紅細胞體的形態(tài)、運動特性；測定其紅細胞總數(shù)、紅細胞壓積、血紅蛋白含量和血清膽紅素,血清谷-丙轉(zhuǎn)氨酶,血糖含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)附紅細胞體附著在紅細胞的表

2、面使其失去原來的形狀變?yōu)榄h(huán)形、球形、短桿形、啞鈴狀或星狀的閃光小體；附紅細胞體單個或聚合在一起存在于血漿中作搖擺、扭轉(zhuǎn)、翻滾等運動；血常規(guī)和血液生化指標測定結(jié)果顯示隨著附紅細胞體感染強度的增加,紅細胞總數(shù)、紅細胞壓積、血紅蛋白含量下降；白細胞總數(shù)明顯升高；血清膽紅素,血清谷-丙轉(zhuǎn)升高；血糖含量下降。 實驗二、犬附紅細胞體病PCR診斷方法的建立與應(yīng)用 根據(jù)Genbank中已經(jīng)發(fā)表的犬附紅細胞體基因序列設(shè)計合成一對特異性引物

3、,通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增出一條與目的片段大小一致,約630bp的基因片段,建立了犬附紅細胞體PCR快速檢測方法,并用于犬附紅細胞體的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。研究結(jié)果表明該方法只能從犬附紅細胞體中擴增出約630bp的基因片段,而犬細小病毒,大腸桿菌等,擴增結(jié)果均為陰性。敏感性試驗表明該方法最低可檢測到10pg的DNA。利用該方法對臨床上12例疑似犬附紅細胞體血樣進行檢測,檢出率75％,而直接鏡檢的陽性檢出率僅為66.7％。這些試