馬鹿茸血蛋白免疫活性肽的制備及其活性研究.pdf

1、生物活性肽是指具有生物活性的多肽，在細(xì)胞生理及代謝功能的調(diào)節(jié)上具有重要的作用，其研究已經(jīng)成為多肽類藥物以及功能性食品的開發(fā)熱點(diǎn)。酶法水解蛋白質(zhì)獲得活性肽是當(dāng)前制備活性肽的主要手段。由于單一酶存在水解位點(diǎn)單一、水解不徹底等缺點(diǎn)，采用復(fù)合酶解已成為研究的一個(gè)重要方向。 本文選用了木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶以及酸性蛋白酶進(jìn)行單一酶解，測定了最佳酶解條件下酶解物促脾淋巴細(xì)胞增殖的活性和對DPPH·自由基的清除能力，其中木瓜蛋白酶

2、酶解液具有最高的免疫活性。采用雙酶復(fù)合酶解，得到木瓜蛋白酶與中性蛋白酶復(fù)合酶解，酶解液具有最高的促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖的能力，復(fù)合酶解條件為：[E/S]為9000U/g，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶的水解溫度各為50℃和45℃，pH各為7.1和6.8，分別水解2h和1.5h。兩酶復(fù)合酶解物的淋巴細(xì)胞增殖率比單酶酶解物增加了20.8％。免疫活性與DPPH·清除能力之間存在顯著的相關(guān)性(γ=0.96，P<0.01)。 采用DA201-C大孔吸附

3、樹脂對復(fù)合酶水解液進(jìn)行初步分離，氨基酸組成分析表明隨著乙醇濃度的升高，疏水性氨基酸含量逐漸增大，75％乙醇洗脫組分具有最高的免疫活性。進(jìn)一步采用SephadexG.15以及RP-HPLC分離，并確定了較優(yōu)的分離條件。 最后對具有最高的清除自由基能力的組分進(jìn)行了體外的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)以及氨基酸序列測定，實(shí)驗(yàn)證明從鹿茸血蛋白酶解液中分離、純化得到的小肽具有增強(qiáng)機(jī)體免疫活性的作用；液質(zhì)聯(lián)用分析得到三個(gè)主要的組分Leu-Tyr(LY)或者Il