馬氏珠母貝全臟器免疫活性肽的制備及其免疫活性的研究.pdf

1、免疫活性肽是一類具有提高機(jī)體免疫系統(tǒng)功能、增強(qiáng)免疫細(xì)胞活性、增強(qiáng)機(jī)體抵抗外來(lái)細(xì)菌和病毒侵害能力的短肽，具有易被人體吸收和免疫源性低等諸多優(yōu)點(diǎn)。目前通過(guò)酶法制備的生物活性肽，在經(jīng)口服攝入人體時(shí)可能會(huì)在腸道被降解，并不能保證其生物活性。本研究針對(duì)目前酶法制備免疫活性肽的問(wèn)題，采用模擬消化酶解的方式制備馬氏珠母貝全臟器免疫活性肽，并以體外免疫活性為指標(biāo)，結(jié)合超濾、凝膠層析、離子交換層析等技術(shù)對(duì)免疫活性肽精制，同時(shí)對(duì)制備的馬氏珠母貝全臟器免疫活

2、性寡肽組分的體內(nèi)免疫活性機(jī)理作了初步探討。以期為馬氏珠母貝全臟器的高值化利用及免疫活性肽保健食品的開發(fā)提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。主要的研究結(jié)果如下:
　　(1)通過(guò)模擬胃腸消化的方式對(duì)馬氏珠母貝全臟器進(jìn)行酶解，并利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)對(duì)胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶酶解階段的工藝過(guò)程進(jìn)行模擬優(yōu)化。利用該方法獲得的優(yōu)化工藝參數(shù)為:復(fù)合酶添加量4500U/g(m胰蛋白酶∶m胰凝乳蛋白酶=6∶1)、料水比1∶2、酶解時(shí)間3.5h，在此條件下，分子量于2

3、00u-2000 u的活性肽得率可達(dá)到55％以上，并通過(guò)隨機(jī)抽取酶解參數(shù)驗(yàn)證了預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與理論值相符。
　　(2)利用超濾手段對(duì)馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物進(jìn)行分離，通過(guò)對(duì)分離各組分的基本成分及分子量分布的研究，證明超濾分離能達(dá)到較好的分離效果;并對(duì)各超濾組分氨基酸成分進(jìn)行研究，推測(cè)馬氏珠母貝酶解產(chǎn)物氨基酸組成中存在較強(qiáng)的生物活性片段。
　　(3)利用體外免疫活性實(shí)驗(yàn)作為指標(biāo)，結(jié)合Sephadex G-25凝膠柱層析、Capto

4、 Q強(qiáng)陰離子交換色譜、Sephadex G-15凝膠柱層析、Superdex Peptide肽柱的分離手段對(duì)馬氏珠母貝全臟器酶解產(chǎn)物超濾組分進(jìn)行反復(fù)篩選純化，獲得了兩個(gè)具有免疫活性的肽段，并利用電噴霧靜電場(chǎng)離子阱串聯(lián)質(zhì)譜分別對(duì)兩個(gè)活性肽進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。
　　分離得到的免疫活性肽SP1的分子量為245.0，為二肽，肽序列為Ala-Arg/Pro-Met;免疫活性肽SP2的分子量為274.0，為二肽，肽序列為Val-Arg。通過(guò)對(duì)最終分

5、離兩組分SP1和SP2的體外免疫活性實(shí)驗(yàn)證明，這兩個(gè)經(jīng)過(guò)精制的免疫活性肽終產(chǎn)物在低濃度(0.3mg/mL)時(shí)都表現(xiàn)出優(yōu)異的體外免疫功能，在所有分離組分中，組分SP2的體外免疫性最強(qiáng)。
　　(4)通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)馬氏珠母貝免疫活性寡肽的體內(nèi)免疫功能進(jìn)行研究。結(jié)果表明，受試樣品能夠顯著提高小鼠淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力和體液免疫的水平(p＜0.05），同時(shí)極顯著地增強(qiáng)經(jīng)抗原誘導(dǎo)的小鼠免疫應(yīng)答能力(p＜0.01);但對(duì)小鼠非特異性免疫功能的影響較