漢麻籽蛋白抗氧化肽的制備及其活性研究.pdf

1、隨著人們生活水平的提高及對(duì)食品和營(yíng)養(yǎng)攝入的要求越來(lái)越高，來(lái)源于天然、在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域具有潛在應(yīng)用前景的抗氧化多肽越來(lái)越受到人們的關(guān)注。漢麻籽蛋白作為一種新型蛋白資源，具有很高的開(kāi)發(fā)研究?jī)r(jià)值。本論文主要研究了漢麻籽蛋白抗氧化肽的酶解工藝、體外抗氧化活性和分離純化，并對(duì)H2O2損傷大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)的保護(hù)作用進(jìn)行了研究。 論文首先研究了漢麻籽蛋白抗氧化肽的酶解工藝。通過(guò)單因素試驗(yàn)，響應(yīng)面回歸分析得到酶解的最佳工

2、藝為：采用Alealase2.4L堿性蛋白酶為酶源，漢麻籽蛋白50mg/mL、水解時(shí)間2h、溫度50℃、加酶量2.2％(w/w)、pH9.4。最優(yōu)酶解條件下，水解度約為19％，10mg/mL酶解產(chǎn)物的DPPH自由基清除率為82.65％，顯示出較好的抗氧化活性。 由于酶解過(guò)程中引入了大量鹽離子，采用DA201-C大孔吸附樹(shù)脂對(duì)漢麻籽蛋白酶解產(chǎn)物(HPHs)進(jìn)行動(dòng)態(tài)脫鹽，脫鹽率為93.03％，最大回收率為98.45％。脫鹽后的HPH

3、s亮度提升，色澤偏向乳白；疏水性氨基酸含量從脫鹽純化前的26.3g/100g增加至純化后34.47g/100g；相對(duì)分子質(zhì)量主要分布在310~2600。采用4種常用的體外抗氧化模型來(lái)評(píng)價(jià)HPHs的抗氧化活性，脫鹽后HPHs的還原力和清除自由基的能力比脫鹽前有不同程度的增強(qiáng)。清除DPPH自由基、超氧陰離子以及羥基自由基的IC50分別從脫鹽前的3.75mg/mL、3.50mg/mL、8.25mg/mL降為脫鹽后的2.75mg/mL、3.00

4、mg/mL、7.70mg/mL。 本論文分別采用凝膠過(guò)濾色譜、半制備RP-HPLC和分析型RP-HPLC對(duì)脫鹽后HPHs進(jìn)行分離純化，最后得到兩個(gè)峰G-25-1-F-a和G-25-1-F-b。在0.02mg/mL濃度下，其DPPH自由基清除率分別為71.24％和65.94％。經(jīng)MALDI-TOF-TOF分析得G-25-1-F-a中母離子m/z441.02和m/z924.49氨基酸序列分別為NHAV和HVRETALV；G-25-1

5、-F-b中母離子m/z1199.54氨基酸序列可能為L(zhǎng)ECNKVDTMF或LKRDEAFCAF。 在細(xì)胞水平上研究了G-25-1-F對(duì)氧化損傷細(xì)胞的保護(hù)作用。經(jīng)0.15mmol/LH2O2作用2h后細(xì)胞活力減少到49.63％，建立了H2O2誘導(dǎo)的PC12氧化損傷模型。濃度為10μg/mL的G-25-1-F即對(duì)細(xì)胞有明顯的保護(hù)作用，但是對(duì)損傷后細(xì)胞的修復(fù)作用不明顯。G-25-1-F對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用機(jī)制可能是因?yàn)镚-25-1-F