小麥蛋白Alcalase水解物中免疫活性肽的研究.pdf

1、免疫活性肽能夠增強機體免疫力，刺激機體淋巴細胞增殖，增強巨噬細胞吞噬功能，提高機體抵御外界病原體感染的能力，降低機體發(fā)病率，抗腫瘤等重要的生理活性，是一種重要的生物活性肽。課題選用Alcalase對小麥蛋白進行酶解，經測定其具有刺激淋巴細胞增殖的免疫活性，經過進一步分離純化得到最高活性的組分。論文主要研究結論如下： 目前已報道的140余種免疫活性肽其相對分子質量都較小，通常在肽鏈中含有堿性氨基酸或在末端具有疏水性氨基酸。實驗選用

2、Alcalase水解小麥蛋白，研究Alcalase水解小麥蛋白生產小麥肽的工藝條件，通過單因素和正交試驗確定最佳條件為：酶用量13×103u/g樣品，pH值9.5，溫度60℃，底物濃度4％，反應時間100min;此時水解度為18.63％。測定水解物中小麥肽的相對分子質量大約分布在147Da～1548Da之間，其中相對分子質量小于600Da的占56.12％，相對分子質量小于2000Da的占74.18％。 采用DA201-C大孔吸附

3、樹脂對小麥蛋白水解物進行脫鹽處理，脫鹽條件為50mg/mL的小麥蛋白水解物以0.5BV/h的流速上樣、以1BV/h的流速用去離子水洗滌、1BV/h的流速用75％乙醇解析，DA201-C大孔吸附樹脂對小麥蛋白水解物的脫鹽率為91.26％。通過體外淋巴細胞增殖法(MTT法)測得脫鹽后的混合物對小鼠脾淋巴細胞增殖具有一定的免疫刺激作用，當添加量為150μg和200μg時差異顯著(P＜0.05)。 根據免疫活性肽通常含有堿性氨基酸這一性

4、質，首先采用732陽離子交換樹脂依據電荷對小麥蛋白Alcalase水解物進行分離，小鼠體外脾淋巴細胞增殖試驗結果顯示在pH8和pH10洗脫下來的組分B和C具有較高的免疫活性，SephadexG-15對組分B和C進一步分離，C3與對照組相比脾淋巴細胞增殖最顯著，半制備RP-HPLC分離組分C3得到十二個組分，其中C3-11活性最高。液質聯用分析C3-11得到兩個單一組分，預測主要組分的相對分子質量617.2，氨基酸結構為His-Cys-P