環(huán)磷酰胺對大鼠睪丸OCT-4和GDNF表達(dá)影響的研究.pdf

1、隨著腫瘤治療手段的不斷發(fā)展,惡性腫瘤患者的生存率逐步提高,在人群中,惡性腫瘤治療后的生存者越來越多。目前在每700個年輕人中,有一人是惡性腫瘤患者?；瘜W(xué)藥物是目前惡性腫瘤治療的基本方法之一,但會給患者帶來生育能力的破壞。保存化療患者生育力已經(jīng)成為腫瘤臨床治療學(xué)的一個迫切需要解決的問題。環(huán)磷酰胺是常用的抗腫瘤藥物,可導(dǎo)致部分抗癌治療患者生育力喪失,故探索環(huán)磷酰胺男性生殖損傷的機(jī)制將對抗癌過程中的生殖保護(hù)提供科學(xué)依據(jù)。本研究使用大鼠環(huán)磷酰胺

2、睪丸損傷模型,通過損傷后睪丸形態(tài)學(xué)評估、精原干細(xì)胞增殖分子GDNF和多潛能性分子OCT-4表達(dá)的檢測,分析睪丸化療損傷對精子發(fā)生及相關(guān)分子表達(dá)的影響,深入理解環(huán)磷酰胺對男性生殖能力損傷機(jī)理。
　　第一部分:環(huán)磷酰胺對大鼠睪丸精子發(fā)生的影響
　　目的:研究環(huán)磷酰胺對大鼠生殖功能的影響。方法:12只8周齡SD大鼠隨機(jī)分為對照組和實驗組,每組6只;實驗組腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg·kg-1·d-1,連續(xù)3d,對照組腹腔注射等量生理鹽

3、水;染毒4周后檢測大鼠精子活動度和精子計數(shù),HE和PAS染色觀察大鼠睪丸組織學(xué)變化,精原細(xì)胞數(shù)量和生精小管直徑,采用Hochest法檢測生精細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果:與對照組比較,實驗組大鼠體重、睪丸和附睪重量均顯著減輕,睪丸組織學(xué)無明顯改變,附睪精子活動度降低,睪丸精子和精原細(xì)胞數(shù)量減少,生精細(xì)胞凋亡增加。結(jié)論:環(huán)磷酰胺短期染毒對大鼠睪丸精子發(fā)生功能具有損害作用。
　　第二部分:睪丸化療損傷對OCT-4和GDNF表達(dá)的影響
　　

4、目的:研究環(huán)磷酰胺對OCT-4和GDNF表達(dá)的影響,探索睪丸化療損傷的機(jī)理。方法:選取12只8周齡SD大鼠隨機(jī)分為對照組和實驗組,每組6只,實驗組腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg·kg-1·d-1,連續(xù)3d,對照組腹腔注射等量生理鹽水;染毒4周后采集睪丸標(biāo)本,應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測OCT-4和GDNF的表達(dá),WesternBlot技術(shù)進(jìn)一步確證OCT-4的水平。結(jié)果:免疫組化及WesternBlot結(jié)果顯示OCT-4表達(dá)水平無明顯變化,而實驗組G

5、DNF表達(dá)明顯減少。結(jié)論:環(huán)磷酰胺致大鼠睪丸組織中GDNF的表達(dá)水平降低,這可能是睪丸化療損傷精原細(xì)胞數(shù)量減少的原因。
　　第三部分:GDNF在生精小管中的階段特異性表達(dá)
　　目的:研究GDNF在睪丸組織中的表達(dá)。方法:選取成年SD大鼠6只,脫頸處死后取睪丸組織,經(jīng)免疫組化及RT-PCR分析在生精小管不同階段GDNF的表達(dá)水平。結(jié)果:免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示GDNF的表達(dá)存在明顯的階段特異性,在StageⅤ生精小管中,