當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的：建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，研究當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304氧化損傷的影響，并初步探討其作用機(jī)制。 方法：通過(guò)酶消化法對(duì)離體的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系ECV-304細(xì)胞進(jìn)行消化傳代，建立過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的ECV-304細(xì)胞氧化損傷模型。采用超濾技術(shù)對(duì)當(dāng)歸紅芪合劑進(jìn)行分離與純化，以不同分子量、不同濃度的當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物作用于氧化損傷的ECV-304細(xì)胞，采用MTT法測(cè)定ECV-

2、304細(xì)胞的活性及存活率，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活力，硫代巴比妥酸(TBA)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)活力，考馬斯亮蘭法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的含量，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期及檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量，RT.PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AT1 mRNA的表達(dá)，觀察當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)ECV-304細(xì)胞氧化損傷的影響。 結(jié)果：經(jīng)0.5mmol/LH2O2刺激后細(xì)胞活性明顯降低，SOD活力明顯降低，MDA活力明顯

3、提高，G0/G1期細(xì)胞的數(shù)目明顯增加，S期細(xì)胞的數(shù)目明顯減少，細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量明顯增加(P<0.01)，AT1mRNA表達(dá)增加(p<0.05)；與H2O2組相比，當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物可以增強(qiáng)H2O2誘導(dǎo)ECV-304細(xì)胞氧化損傷的細(xì)胞活性，增加細(xì)胞的存活率且以作用72h為佳，提高氧化損傷的ECV-304細(xì)胞的SOD活力，降低氧化損傷的ECV-304細(xì)胞的MDA活力，促進(jìn)氧化損傷的ECV-304細(xì)胞向S期轉(zhuǎn)變，減少氧化損傷的ECV-30

4、4.細(xì)胞內(nèi)Ca2+含量，減少細(xì)胞內(nèi)ATlmRNA表達(dá)(p<0.01，p<0.05)，且以5萬(wàn)分子量以下為佳。 結(jié)論：H2O2對(duì)離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株ECV-304細(xì)胞有明顯地致氧化損傷作用；當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物可有效抑制H2O2誘導(dǎo)的ECV-304細(xì)胞的氧化損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，且以5萬(wàn)分子量以下、高濃度、72h為佳；當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)氧化損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用可能與其提高了抗氧化酶活性，降低了脂質(zhì)過(guò)氧化物活性，