咖啡酸抗過氧化氫誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及機(jī)制的初步探討.pdf

1、目的:用 H2O2誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株凋亡建立氧化應(yīng)激模型,觀察咖啡酸(Caffeic acid,CA)對(duì)H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC-12)凋亡的保護(hù)作用并初步探討其機(jī)制。
　　方法:分別用不同濃度的咖啡酸和H2O2處理 HUVEC-12,通過MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活力,流式細(xì)胞術(shù)鑒定內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率,用吖啶橙溴化乙啶熒光染色(AO-EB染色)觀察細(xì)胞凋亡形態(tài),RT-PCR及Western blot分別檢測(cè)NF-κB

2、、P53和Bcl-2的基因和蛋白表達(dá)。為了檢測(cè)H2O2或CA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞作用的量效關(guān)系,分別用0.1、0.2、0.3、0.4和0.5mmol/L的H2O2或0.1,1.0,10,100μmol/L的CA作用細(xì)胞24小時(shí);同時(shí),為了檢測(cè)H2O2或CA對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞作用的時(shí)效關(guān)系,采用上述濃度的H2O2或CA分別對(duì)細(xì)胞作用3、6、12、24和48小時(shí)。
　　結(jié)果:用不同濃度 H2O2(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L)孵

3、育細(xì)胞24小時(shí)后,細(xì)胞存活率隨藥物濃度的增加依次下降;0.2 mmol/L H2O2孵育細(xì)胞24小時(shí)后,NF-κB基因和蛋白表達(dá)呈濃度依賴性上調(diào),加入NF-κB阻斷劑PDTC(100μmol/L)后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯改變,凋亡細(xì)胞減少,同時(shí)P53表達(dá)下調(diào),Bcl-2表達(dá)上調(diào)。和不同濃度咖啡酸共同孵育細(xì)胞24小時(shí),MTT提示,咖啡酸能明顯減輕H2O2對(duì)HUVEC-12的損傷,提高細(xì)胞的存活率,流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)提示咖啡酸能使H2O2誘導(dǎo)的HU