當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的影響.pdf

1、目的:研究當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)所致PC12細(xì)胞損傷的影響并探討其作用機(jī)制。
　　方法:本研究采用不同劑量H2O2以不同時(shí)間作用于PC12細(xì)胞,篩選出最佳損傷劑量及時(shí)間,最終選用200μmol·L-1 H2O2與PC12細(xì)胞共同孵育6h,建立細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型,加用高(1.5g·L-1)、中(0.75g·L-1)、低(0.375g·L-1)三個(gè)不同劑量的當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物(10萬(wàn)分子量)進(jìn)行干涉分組,實(shí)驗(yàn)共

2、分為5組:對(duì)照組,模型組,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物高劑量組,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物中劑量組,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物低劑量組。用MTT法測(cè)定各組細(xì)胞存活率的變化;采用生化法檢測(cè)細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化物丙二醛(MDA)含量、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用雙氯熒光黃乙酸乙酯(DCF-DA)染色,熒光酶標(biāo)儀檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的含量;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率;采用羅丹明123(RH123)染色,激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)

3、胞線粒體膜電位變化;用蛋白印跡法檢測(cè)Caspase-3、Bax和Bcl-2相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.各組細(xì)胞存活率的變化:H2O2損傷PC12細(xì)胞后細(xì)胞活力下降明顯,與對(duì)照組相比,模型組PC12的存活率明顯下降(p<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組PC12的存活率均明顯增加(p<0.05),以高劑量組最為顯著。
　　2.各組細(xì)胞MDA、LDH、SOD的檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組MDA

4、、LDH含量增多,SOD含量下降(p<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組MDA、LDH均含量降低,SOD含量均增加(p<0.05)。
　　3.各組細(xì)胞內(nèi)ROS含量的檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組ROS的含量明顯增多(p<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組ROS含量均顯著降低(p<0.05)。
　　4.各組細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組PC12細(xì)胞凋亡增加顯著(p<0.05);與

5、模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組細(xì)胞凋亡明顯降低(p<0.05)。
　　5.細(xì)胞線粒體膜電位檢測(cè)結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組PC12細(xì)胞內(nèi)RH123熒光強(qiáng)度明顯減弱,線粒體膜電位降低(p<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組PC12細(xì)胞內(nèi)RH123熒光強(qiáng)度均明顯增強(qiáng),線粒體膜電位升高(p<0.05)。
　　6. Caspase-3、Bax和Bcl-2檢查結(jié)果:與對(duì)照組相比,模型組Caspase-3、Bax

6、蛋白表達(dá)增強(qiáng),Bcl-2表達(dá)減弱,Bcl-2/Bax比值降低(p<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物干涉組Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)均減弱,Bcl-2表達(dá)均增強(qiáng),Bcl-2/Bax比值升高(p<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。
　　2.當(dāng)歸紅芪超濾膜提取物可以通過(guò)降低氧化損傷的PC12細(xì)胞胞內(nèi)MDA、ROS的含量,增加細(xì)胞SOD活力