扇貝裙邊糖胺聚糖對過氧化氫損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：通過觀察扇貝裙邊糖胺聚糖(SS-GAG)對過氧化氫(H<,2>O<,2>)損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞的合成及分泌功能的影響，進(jìn)一步探討扇貝裙邊提取物(ESS)抗動脈粥樣硬化(AS)的作用機(jī)理。 方法：1、采用體外培養(yǎng)的方法，用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HLJVEC，ECV304)，建立H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型。2、用噻唑藍(lán)(MTT)法觀察SS-GAG對不同濃度的H<,2>O<,2>損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的影響。

2、3、用化學(xué)比色的方法測定分析SS-GAG對H<,2>O<,2>損傷的血管內(nèi)皮細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)釋放的影響。4、用酶促反應(yīng)的方法測定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽過氧化酶(GSH-PX)的活性；用化學(xué)比色法測定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)總的抗氧化能力(T-AOC)，分析SS-GAG對H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后GSH-PX及T-AOC活性的影響。5、用黃嘌呤氧化酶法測定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)的超氧化物歧化酶(SOD)的活性；用硫代巴比妥酸反應(yīng)物(TBARS

3、)法測定內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)氧化損傷產(chǎn)物丙二醛(MDA)的含量；分析SS-GAG對受損細(xì)胞的SOD活性及損傷產(chǎn)物MDA的含量影響。6、建立H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，用硝酸還原酶法測定SS-GAG對血管內(nèi)皮細(xì)胞的血管內(nèi)皮舒張因子一氧化氮(NO)含量的影響；用化學(xué)比色法測定SS-GAG對血管內(nèi)皮細(xì)胞的一氧化氮合酶(NOS)活性的影響。7、建立H<,2>O<,2>所致的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷模型，用放射免疫法測定內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌

4、的前列環(huán)素(PGI<,2>)的穩(wěn)定性代謝產(chǎn)物6-酮-前列環(huán)素F<,1α>(PGF<,1α>)和血栓素A<,2>(TX A<,2>)的穩(wěn)定性代謝產(chǎn)物血栓素<,2> (TX B<,2>)的含量，分析SS-GAG對血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后的合成分泌功能的影響。8、用放射免疫法測定血管內(nèi)皮細(xì)胞合成分泌的縮血管生物活性多肽-內(nèi)皮素ET的含量，分析SS-GAG對H<,2>O<,2>誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞的合成分泌功能的影響。 結(jié)果：

5、1、H<,2>O<,2>在75、150、300、600、1500、3000、6000μmol/L濃度時對血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有明顯抑制作用，H<,2>O<,2>的濃度與細(xì)胞增殖活性呈反比，H<,2>O<,2>的濃度越高，其抑制作用越強(qiáng)，二者有明顯量效關(guān)系。2.SS-GAG對低濃度的H<,2>O<,2>(75～600μol/L)引起的VEC損傷有一定對抗作用，尤其是對抗H<,2>O<,2>75μmol/L時的作用顯著(P<0.05)；但在高

6、濃度H<,2>O<,2>(1500～6000μmol/L)存在時，SS-GAG則進(jìn)一步抑制細(xì)胞的增殖活性(P<0.05)。3、H<,2>O<,2>損傷組血管內(nèi)皮細(xì)胞的LDH活性明顯高于正常對照組；與損傷對照組比較，SS-GAG各保護(hù)組(50、100、200μg/ml)內(nèi)皮細(xì)胞的LDH活性顯著降低(P<0.01)。4、與正常對照組比較，損傷對照組細(xì)胞內(nèi)GSH-PX活性及T-AOC明顯降低(P<0.01)；SS-GAG(50、100、200

7、μg/ml)各保護(hù)組細(xì)胞內(nèi)GSH-PX、T-AOC活力均明顯高于損傷對照組(P<0.05，P<0.01)。5、與正常對照組比較，H<,2>O<,2>損傷組內(nèi)皮細(xì)胞的SOD活性明顯降低，MDA含量明顯增加(P<0.01)； SS-GAG各保護(hù)組(50、100、200μg/ml)與損傷對照組比較，SOD活性明顯增強(qiáng)，MDA含量明顯減少(P<0.01)。6、用SS-GAG(50、100、200μg/ml)預(yù)處理的各保護(hù)組與H<,2>O<,2>

8、損傷對照組比較，其細(xì)胞內(nèi)NO、NOS活性明顯提高(P<0.01)。7、H<,2>O<,2>損傷組與正常對照組比較，細(xì)胞培養(yǎng)液中的PGF<,1α>水平明顯降低，TX B<,2>的含量明顯增加(P<0.01)：SS-GAG在50、100、200ug/ml濃度時可逆轉(zhuǎn)H<,2>O<,2>的作用，提高PGF<,1α>水平，降低TXB2含量(P<0.01)。8、H<,2>O<,2>的損傷組可使血管內(nèi)皮細(xì)胞中的ET表達(dá)增強(qiáng)，SS-GAG(50、10

9、0、200ug/ml)保護(hù)組可顯著降低受損細(xì)胞ET的表達(dá)(P<0.01)。 結(jié)論：扇貝裙邊糖胺聚糖(SS-GAG)能逆轉(zhuǎn)低濃度過氧化氫對內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的抑制：并能增強(qiáng)受損的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)SOD和NOS的活性；提高細(xì)胞內(nèi)GSH-PX的活性和細(xì)胞的T-AOC；有效降低脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生和LDH的漏出；明顯增加內(nèi)皮依賴性舒張因子NO和PGF<,1α>等舒血管物質(zhì)的含量；顯著降低TXB<,2>和ET等縮血管物質(zhì)的分泌。