雙氫青蒿素對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞UCHL1基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究雙氫青蒿素對(duì)人前列腺癌 PC-3細(xì)胞株中抑癌基因UCHL1表達(dá)的影響，并探討其可能的調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　方法：PC-3細(xì)胞經(jīng)不同濃度（25、50和100μmol/L）的DHA處理48 h后，并設(shè)空白對(duì)照組。采用FCM法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率和細(xì)胞周期變化。采用免疫熒光染色法檢測(cè)UCHL1和DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1（DNA methyltransferase1，DNMT1)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位及表達(dá)量。蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)UCHL1、DN

2、MT1、磷酸化Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）和Akt蛋白的表達(dá)；并且以1μmol/L磷酸肌醇-3激酶（phosphoin-ositide3-kinase，PI3K）家族抑制劑Wortmanin作為陽(yáng)性對(duì)照，比較DHA處理組p-Akt蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：DHA能明顯誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡，并使細(xì)胞停滯在G2/M期，與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。DHA處理組中DNMT1蛋白由細(xì)胞核轉(zhuǎn)

3、到細(xì)胞質(zhì)，與空白對(duì)照組比較，DNMT1蛋白在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中總的表達(dá)水平明顯下調(diào)（P＜0.05）；而 UCHL1蛋白表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯上調(diào)（P＜0.05）。與空白對(duì)照組比較，DHA處理組與陽(yáng)性對(duì)照組中UCHL1蛋白表達(dá)均上調(diào)，DNMT1表達(dá)水平均下降（均P＜0.05），p-Akt蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05，而 Akt蛋白表達(dá)量無明顯變化（P＞0.05）；其中，高濃度DHA處理組中p-Akt蛋白表達(dá)下調(diào)更為顯著，更接近于陽(yáng)性對(duì)照組。