siRNA沉默HIF-1α基因?qū)η傲邢侔┘?xì)胞PC-3放射敏感性的影響.pdf

1、目的:觀察siRNA沉默缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)基因?qū)に胤且蕾囆郧傲邢侔┘?xì)胞系PC3體外放射治療效果的影響,并探討可能涉及的機(jī)制,為前列腺癌放射治療提供參考。
　　 方法:PC3細(xì)胞分三組:PC3組、PC3+NC siRNA組、PC3+HIF-1αsiRNA組。以經(jīng)過(guò)篩選證實(shí)的HIF-1αsiRNA(HIF-1α沉默組)、NC siRNA(陰性對(duì)照組)和陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染PC3細(xì)胞。采

2、用細(xì)胞增殖克隆形成法測(cè)定不同劑量放射治療后的克隆形成數(shù),以單靶多擊模型分析并計(jì)算放射敏感性指標(biāo)Do、Dq、SF2、N、SER,并繪制細(xì)胞放射劑量.存活曲線。CCK-8法測(cè)定三組PC3細(xì)胞單次6Gy照射后不同時(shí)間的存活曲線。流式細(xì)胞術(shù)分析三組PC3細(xì)胞放療后72小時(shí)的細(xì)胞凋亡率,以及放療前和放療后72小時(shí)的細(xì)胞周期分布。
　　 結(jié)果:(1)RADIOMED軟件分析顯示PC3+HIF-1αsiRNA組Do、SF2、Dq、N值較PC3

3、和PC3+NC siRNA組低；以D0計(jì)算,PC3+HIF-1αsiRNA組相對(duì)于PC3組的放射增敏比(SER)為1.24。(2)CCK-8法測(cè)定重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)資料方差分析顯示HIF-1α沉默組與PC3、PC3+NC siRNA兩組比較,放療后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)受到明顯抑制(24小時(shí):F=139.741；48小時(shí):F=495.49；72小時(shí):F=426.89；96小時(shí):F=471.11,各時(shí)間點(diǎn)P值均<0.01

4、),兩對(duì)照組間無(wú)明顯差異(P>D.∞)。(3)6Gy放射治療后72小時(shí)流式細(xì)胞儀測(cè)定顯示PC3、PC3+NC siRNA、PC3+HIF-1αsiRNA三組的凋亡率分別為17.9±1.65％、18.6±1.37％、29.1±2.16％。PC3+HIF-1αsiRNA組凋亡率高于兩對(duì)照組(F=311.73,P<0.01),兩組對(duì)照間細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯差異(P>0.05)。(4)放療前和放療后72小時(shí)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定顯示HIF-1αsiRNA沉