胃癌相關基因的克隆與鑒定.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文胃癌相關基因的克隆與鑒定姓名：任群申請學位級別：博士專業(yè)：細胞生物學指導教師：張學2003.4.1性、化學物理性，以及病毒性致癌因素只是誘因，而基因改變才是導致細胞生長發(fā)育的正負調控和功能紊亂的分子基礎。因此，開展胃癌相關基因的克隆和鑒定工作，是我國圍繞基因組計劃開展的一項重要具體工作，具有重要的意義。本文采用染色體雜合性丟失研究(10ssofheterozygosity，LOH)、篩查胃癌相關單個基因的突變以及

2、抑制性消減雜交(suppressedsubtraetivehybrizadtion，SSH)的方法發(fā)現并鑒定胃癌的相關基因，將為胃癌的深入研究打下基礎。材料和方法胃癌標本來源于中國醫(yī)科大學附屬第一臨床學院腫瘤科患者，手術切取胃癌組織及距癌組織1厘米以上的癌旁正常組織。手術切取胃癌組織及癌旁正常組織均經病理證實。118號染色體的雜合性丟失分析選擇18號染色體的9對短插入／缺失多態(tài)(ShortInsertionDeletionP01ymor

3、phism，SIDP)標記，以激光捕獲顯微切割(LaserCaptureMeerodissection，LCM)一高可信度全基因組擴增(highfidelity—wholegenomeamplification，HF—wGA)一變性高效液相色譜(DenaturingHighPerformanceLiquidChromatography，DHPLC)聯合技術進行LOH的分析，與癌旁正常組織相比，癌組織DNA的PCR擴增產物的DHPLC色譜

4、蜂數目減少或色譜峰相對高度減少50％以上判定為LOH，所有陽性病例應用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳加硝酸銀染色證實。2KLF6基因的突變分析聯合應用PCR和DHPLC技術對35例胃癌患者組織進行ⅪJ唔基因編碼區(qū)全部外顯子序列突變篩查。與正常組織的色譜峰型進行比較，在部分變性溫度條件下，相應腫瘤組織色譜蜂的個數和蜂的對稱性改變，如出現肩峰及不對稱峰，說明有變異發(fā)生。將此PCR產物純化后測序，然后與基因庫序列比較確定變異性質。3BRAF基因v59