骨痹消治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)是一種嚴(yán)重危害病人生活質(zhì)量的慢性、退行性關(guān)節(jié)疾病。其中，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(KOA)在人體各關(guān)節(jié)中發(fā)病率最高，關(guān)節(jié)軟骨和周?chē)浗M織的病變是KOA的兩個(gè)重要的病理基礎(chǔ)。西醫(yī)治療目前缺少有效的方法，中醫(yī)藥對(duì)這些軟組織的作用是肯定的，但目前尚缺乏有說(shuō)服力的實(shí)驗(yàn)研究n[1]。本實(shí)驗(yàn)采用中西醫(yī)結(jié)合方法，應(yīng)用光、透射電鏡、生化法、免疫組化法等先進(jìn)手段，從整體(KOA兔)、細(xì)胞(凋亡)、分子(SOD、MD

2、A、NO)和基因水平(DNA)系統(tǒng)地研究骨痹消對(duì)KOA的治療作用機(jī)理，加大科研力度，對(duì)療效評(píng)定進(jìn)行量化、客觀化，使之具有科學(xué)性、可比性、可靠性，并闡明“骨痹消”對(duì)膝關(guān)節(jié)周?chē)能浗M織(如滑膜等)損傷的治療作用機(jī)制。 目的：探討骨痹消對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔KOA的治療作用。方法:將60只日本大耳白兔隨機(jī)分為5組(正常對(duì)照組、模型組、塞來(lái)昔布組、骨痹消組、壯骨關(guān)節(jié)丸組)，每組12只。同等條件下正常飼養(yǎng)1周后，正常對(duì)照組12只正常飼養(yǎng)，作為空白對(duì)照

3、，其余4組兔均采用伸膝制動(dòng)OA動(dòng)物模型法造模，制成兔KOA模型； 給藥方法：正常對(duì)照組和模型組：從造模第1天起經(jīng)胃灌生理鹽水2ml/Bid/d；塞來(lái)昔布組：從造模第1天起經(jīng)胃灌藥，2ml/Bid/d(55mg/d)；骨痹消組：從造模第1天起經(jīng)胃灌藥，2ml/Bid/d(688mg/d)；壯骨關(guān)節(jié)丸組：從造模第1天起，經(jīng)胃灌藥，2ml/Bid/d(1650mg/d)。 檢測(cè)指標(biāo)： ①用生化法，檢測(cè)五組兔治療后6周及

4、10周各組血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析； ②于治療后6周及10周取材，進(jìn)行肉眼大體觀察后，分別取脛骨內(nèi)髁關(guān)節(jié)軟骨及膝前正中部滑膜，固定，脫水，包埋，切片，染色，用光鏡、透射電鏡對(duì)兔膝關(guān)節(jié)滑膜及軟骨組織進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察； ③同時(shí)，取膝前正中部滑膜組織，勻漿，取上清液檢測(cè)滑膜SOD、MDA水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析； ④6周及10周后隨機(jī)取各組兔膝關(guān)節(jié)軟骨，用T

5、UNEL方法進(jìn)行軟骨細(xì)胞凋亡的原位檢測(cè)，采用CIAS-1000型圖像分析系統(tǒng)軟件分析5組兔軟骨細(xì)胞AI及Bcl-2與p53基因表達(dá)灰度值，探討其作用機(jī)理。 結(jié)果：利用公認(rèn)的伸膝制動(dòng)OA動(dòng)物模型法造模，模型成功。 通過(guò)生化指標(biāo)檢測(cè)模型組及各治療組在6周、10周時(shí)兔血清SOD、MDA、NO及滑膜SOD、MDA水平均發(fā)生變化。其中，模型組血清和滑膜SOD水平均較低，MDA水平均較高，血清NO水平升高，而各治療組血清和滑膜SOD

6、活性均有不同程度的增高，MDA和NO水平有不同程度的降低，且組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 通過(guò)各組關(guān)節(jié)軟骨的大致肉眼觀察，見(jiàn)造模6周后模型組兔關(guān)節(jié)軟骨失去原有光澤，發(fā)黃，可見(jiàn)少量糜爛點(diǎn)，滑膜組織增生;10周后軟骨明顯失去原有光澤，發(fā)黃，色澤變暗淡，軟骨表面凹凸不平，周?chē)っ黠@增生。而各治療組病變均不同程度好轉(zhuǎn)，以骨痹消組最為明顯。 通過(guò)電鏡、光鏡觀察，模型組電鏡下6周時(shí)可見(jiàn)細(xì)胞固縮，細(xì)胞略呈錐形，胞核高度固縮，周?chē)霈F(xiàn)空隙，

7、細(xì)胞器消失，胞膜破損，基質(zhì)中有深密度碎屑，10周時(shí)出現(xiàn)凋亡小體。光鏡下模型組6周軟骨細(xì)胞排列紊亂，簇集，細(xì)胞核固縮，細(xì)胞內(nèi)成分減少，基質(zhì)內(nèi)膠原發(fā)生輕度纖維變性。10周時(shí)細(xì)胞簇集明顯，核固縮，核溶，基質(zhì)染色不均，淡染，膠原纖維明顯，各組間關(guān)節(jié)軟骨病理學(xué)變化評(píng)分比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；光鏡下模型組6周時(shí)滑膜上皮增生，細(xì)胞間可見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，滑膜下局部血管長(zhǎng)入。10周時(shí)滑膜上皮重度增生，細(xì)胞肥大，滑膜下大量肉芽組織增生，大量血管長(zhǎng)入，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

8、骨痹消組、壯骨關(guān)節(jié)丸組、塞來(lái)昔布組在鏡下觀察，病變較模型組有不同程度的減輕，以骨痹消組最佳。光鏡下，細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)顯示：模型組見(jiàn)到p53、Bcl-2的表達(dá)增加。骨痹消組、壯骨關(guān)節(jié)丸組、塞來(lái)昔布組Bcl-2的表達(dá)隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增強(qiáng)，而p53的表達(dá)逐漸減弱。6周及10周時(shí)骨痹消組p53的表達(dá)與模型組相比灰度值升高，組間比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)。6周及10周時(shí)骨痹消組Bcl-2表達(dá)較模型組相比灰度值下降，兩組間比較具有非

9、常顯著性差異(P＜0.01)。應(yīng)用TUNEL法進(jìn)行軟骨凋亡細(xì)胞的原位檢測(cè)：顯微鏡下見(jiàn)模型組軟骨細(xì)胞的凋亡指數(shù)明顯增高。治療后，骨痹消組、壯骨關(guān)節(jié)丸組、塞來(lái)昔布組有不同程度下降，且骨痹消組下降最為明顯，10周時(shí)，與模型組相比具有非常顯著性差異(P＜0.01)。 結(jié)論：骨痹消可清除機(jī)體多余自由基，糾正氧自由基代謝紊亂；促進(jìn)軟骨細(xì)胞代謝及軟骨修復(fù)，維持軟骨結(jié)構(gòu)的相對(duì)完整；抑制滑膜炎性改變，減少滑膜炎性物質(zhì)釋放入關(guān)節(jié)腔，阻礙炎性滑膜對(duì)軟