板藍根顆粒質(zhì)量控制、血清藥理學及藥物代謝學的初步研究.pdf

1、目的：
　　 本文以板藍根顆粒為研究對象，建立了板藍根顆粒的HPLC指紋圖譜及其中四種成分的含量測定方法，并對藥液及其含藥血清的抗乙肝病毒作用進行了初步研究，最后對板藍根顆粒體內(nèi)代謝情況進行初步分析，擬找出其體內(nèi)作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，從而試圖正確、全面地揭示板藍根顆粒藥效作用機理，為建立有效、可靠的質(zhì)控方法提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 本文利用HPLC法建立了板藍根顆粒的化學指紋圖譜，同時測定了10批板藍根顆粒中四種

2、指標成分的含量，并分別進行了方法學考察，運用中國藥典委員會頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件(2004版A)對指紋圖譜相關(guān)技術(shù)參數(shù)進行數(shù)據(jù)分析；運用血清藥理學，選取目前應(yīng)用最廣泛的HepG2.2.15為細胞模型對板藍根顆粒藥液及其含藥血清的抗乙肝病毒作用進行初步研究，采用ELISA技術(shù)雙抗體夾心法檢測細胞上清液中HBsAg及HBeAg，計算抗原抑制率，并應(yīng)用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析；分別灌胃給予Beagle犬化學成

3、分差異最大的敖東及三九廠生產(chǎn)的板藍根顆粒，按照試驗設(shè)計方案在不同時間點采集血液樣本并分離血清，利用HPLC/MS/MS法，采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)初步對犬血清中四種指標成分的體內(nèi)代謝產(chǎn)物進行鑒定，同時列出了可能的代謝產(chǎn)物在不同時間點含藥血清中的分布情況。
　　 結(jié)果：
　　 1、建立了10批板藍根顆粒的HPLC指紋圖譜，確立了15個共有峰，確認了指紋圖譜中尿苷、鳥苷、表告依春、腺苷4個特征峰化合物，同時測定了10批板藍根

4、顆粒中四種指標成分的含量并分別進行了方法學考察。結(jié)果表明，尿苷、鳥苷、表告依春、腺苷在1.25μg/m1～40.0μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，該方法儀器精密度、方法重復(fù)性RSD均小于3％，四種成分的平均回收率均在95％～105％之內(nèi)，表明該方法準確度良好，可以用于板藍根顆粒HPLC指紋圖譜的建立及四種指標成分的含量測定。
　　 2、對敖東及三九板藍根顆粒藥液及其含藥血清的抗乙肝病毒作用進行了初步研究。結(jié)果表明，三九板藍根顆粒藥

5、液對HBsAg及HBeAg均有顯著的抑制作用，敖東板藍根顆粒藥液對HBsAg有顯著的抑制作用，但抑制作用顯著弱于三九板藍根顆粒，而對HBeAg則沒有顯著的抑制作用；敖東含藥血清對HBsAg及HBeAg的抑制作用總體上顯著強于三九，但其中12h三九含藥血清對兩種抗原的抑制作用均顯著強于敖東。
　　 3、對灌胃給予敖東及三九板藍根顆粒犬血清中尿苷、鳥苷、表告依春、腺苷四種成分可能的Ⅰ相及Ⅱ相代謝產(chǎn)物進行了初步鑒定，最終找到可能的代謝

6、產(chǎn)物共12種，并列出了各種代謝產(chǎn)物在不同時間點含藥血清中的分布情況。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過建立板藍根顆粒的HPLC指紋圖譜并對10批板藍根顆粒中四種指標成分進行含量測定，從中發(fā)現(xiàn)10批板藍根顆粒指紋圖譜大部分相似度良好，但化學成分的含量差異較大，說明有必要在指紋圖譜評價基礎(chǔ)上盡可能增加化學成分尤其是有效成分的含量測定，進一步評價藥品質(zhì)量。而板藍根及其制劑有效成分的觀點尚未統(tǒng)一，因此，找到其起效的物質(zhì)基礎(chǔ)對評價板藍

7、根及其制劑的質(zhì)量具有重大意義。
　　 2、通過對板藍根顆粒藥液及其含藥血清的抗乙肝病毒作用研究發(fā)現(xiàn)，兩者對抗原分泌的影響并不一致。由于藥液對抗原的抑制作用并不能反映藥物進入體內(nèi)的真實作用情況，因此含藥血清對抗原分泌的影響更具有實際意義。綜合試驗結(jié)果進行推測，四種指標成分及其相關(guān)代謝產(chǎn)物在抗乙肝病毒作用中可能發(fā)揮了主要作用，但仍可能有些未知成分同樣對其有抑制作用。由于體內(nèi)環(huán)境極為復(fù)雜，因此，上述推斷還有待進一步研究。