中國結(jié)核分枝桿菌臨床分離株二線抗結(jié)核藥物耐藥性的初步研究.pdf

1、目的:
　　評價BACTEC MGIT960法檢測一線、二線抗結(jié)核藥物敏感性的效果;初步分析結(jié)核分枝桿菌喹諾酮類藥物耐藥株gyr基因突變特點,探討耐藥表型與gyr基因突變的關(guān)系;用間隔區(qū)寡核苷酸分型(Spacer oligonucleotide typing,Spoligotyping)對結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進行基因分型,分析北京家族菌株與喹諾酮類藥物耐藥的相關(guān)性。
　　材料和方法:
　　1、214株結(jié)核分枝桿菌臨床

2、分離株是從中國疾病預(yù)防與控制中心傳染病所結(jié)核病實驗室/傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室結(jié)核病組保存的結(jié)核分枝桿菌菌株庫中抽取。
　　2、分別采用“世界衛(wèi)生組織/國際防癆與肺部疾病聯(lián)合會”推薦的比例法及世界衛(wèi)生組織推薦的BACTEC MGIT960方法,對所選菌株進行一線抗結(jié)核藥物異煙肼(Isoniazid, INH)、利福平(Rifampicin, RFP)、鏈霉素(Streptomycin, SM)和乙胺丁醇(Ethambutol,

3、 EMB);二線抗結(jié)核藥物卷曲霉素(Capreomycin, CPM)、卡那霉素(Kanamycin, KAN)、氧氟沙星(Ofloxacin,OFLX)、乙硫異煙胺(EthionamideETH)敏感性試驗,綜合比較分析兩種方法的結(jié)果,進行驗證、評估。
　　3、采用直接測序法檢測結(jié)核分枝桿菌耐藥相關(guān)基因gyrA、gyrB的突變情況并分析基因突變與耐藥表型及結(jié)核分枝桿菌北京基因型的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1、用BACT

4、EC MGIT960法與L-J固體比例法對214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進行藥物敏感性檢測,異煙肼、利福平、鏈霉素、乙胺丁醇、卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫異煙胺的符合率分別97.7％(209/214)、94.4%(202/214)、95.3%(204/214)、83.1%(178/214)、96.0%(205/214)、94.9%(203/214)、97.7%(209/214)和85.5%(183/214)。BACTEC MGIT

5、960法進行一線抗結(jié)核藥物藥敏試驗所需時間平均8.07天,較L-J固體比例法26.27天提前18.20天,二線抗結(jié)核藥物藥敏試驗所需時間平均為7.75天,較L-J固體比例法25.92天提前18.17天。兩者間的差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中有59株對氧氟沙星耐藥,其中50株為MDR-TB合并氧氟沙星耐藥。耐藥株中有41株 gyr基因發(fā)生突變,突變率為69.5%,其中40株為MDR-TB合并氧氟沙

6、星耐藥。40株為 gyrA基因突變,突變位點包括90,91和94位氨基酸;5株為 gyrB基因突變,突變位點為500,506,534和539位氨基酸,4株為 gyrA和gyrB基因共同突變。
　　3、214株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株中,北京基因型和非北京基因型菌株對二線藥物氧氟沙星的耐藥率分別為40.21%和34.48%,兩者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(X2=0.23, P>0.05);gyrA基因的90、91、94氨基酸位點突變在結(jié)核分

7、枝桿菌北京基因型與非北京基因型間的發(fā)生率分別為17.95%、7.69%、41.03%和10%、10%、35%,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(X2=0.43、0.18、0.67,P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、BACTEC MGIT960藥敏方法與傳統(tǒng)L-J固體比例法對于一線抗結(jié)核藥物異煙肼、利福平和鏈霉素;二線藥物卷曲霉素、卡那霉素和氧氟沙星的藥敏檢測結(jié)果具有較好的一致性,但乙胺丁醇和乙硫異煙胺的藥敏檢測結(jié)果一致性較低,還需進一步

8、研究。
　　2、BACTEC MGIT960法所需的檢測時間較短,有利于耐藥結(jié)核病人的早期診斷和治療。
　　3、結(jié)核分枝桿菌喹諾酮類藥物的耐藥主要與gyr基因突變有關(guān),gyrA基因突變是gyr基因突變的主要形式。其中94、90、91位氨基酸突變特異性較高,可作為喹諾酮耐藥標志,為進行喹諾酮類藥物耐藥的快速檢測和監(jiān)測提供了良好基礎(chǔ)。
　　4、從常規(guī)耐藥和gyr基因突變檢測結(jié)果顯示北京型MTB菌株與喹諾酮類藥物耐藥及耐藥基